摘要 应用0.3%HAc水溶液/乙腈(53∶47)为流动相，在Zobax Eclipse XDB C8色谱上，以对甲苯甲酸为内标物，建立了2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺的高效液相色谱分析方法，方法的相对标准偏差<0.2%。2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺进样量在0.2～2μg范围内良好的线性关系（r=0.9999）。
关键词 2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺 高效液相色谱 对甲苯甲酸 测定
0 前言
2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺，系一种广谱抗感染及抗
寄生虫药，目前为止，尚未见2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺分析方法的专门文献报道。本文用Zobax Eclipse XDB C8色谱柱，试验了工业品2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺的高效液相色谱分析方法，操作简便、快速，方法的相对偏差<0.2%，符合定量分析要求。
1 实验部分
1.1 仪器
Agilent公司LC-1100型高效液相色谱仪，带柱温箱、紫外可见光谱检测器和化学工作站。
1.2 试剂和溶液
2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺标准品，含量≥99.99%；
对甲苯甲酸（分析纯）为内标物，使用时用无水甲醇配成约0.8mg/mL溶液；
标准溶液：准确称取2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺标准品0.1g于100mL容量瓶中，再准确加入10mL内标溶液，加50mL乙腈，于超声波下振荡2min使溶解完全，冷却，再用乙腈定容，摇匀。
1.3 色谱条件
色谱柱：Zobax Eclipse XDB C8，4.6mmID×150mm；
流动相：0.3%HAc水溶液/乙腈=53∶47，使用前经0.5μm滤膜过滤；
流速：1ml/min；
紫外检测波长：254nm；
柱温：40℃；
进样量：1μL；
1.4 试验方法
准确称取试样0.1g于100mL容量瓶中，再准确加入10mL内标溶液，加50mL乙腈，于超声波下振荡2min使溶解完全，冷却，再用乙腈定容，摇匀。待仪器稳定后，采用内标法进行色谱分析，结果由化学工作站自动处理。
2 结果与讨论
2.1 溶剂及流动相的选择
由于2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺在甲醇中溶解度较小，而易溶于乙腈，故样品用乙腈溶解，流动相采用乙腈/水系统；内标物对甲苯甲酸易溶于甲醇，故内标液用甲醇配制。试验表明，10mL甲醇和50mL乙腈在超声波下振荡2min样品可以溶解完全，且不会影响样品的测定。
由于2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺在水中呈弱酸性，故应将流动相调节为弱酸性，以抑制2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺的离解。试验表明，流动相可采用0.3%HAc水溶液（PH≈3）与乙腈系统。改变二者不同的配比，考察样品中2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺与杂质色谱峰的分离情况。试验表明，在流速为1ml/min下，0.3%HAc水溶液/乙腈=53∶47时，样品峰与杂质峰已分离完全。
2.2 内标物的选择
为选择合适的内标物，我们试用了苯甲酸、水杨酸、邻苯二甲酸、对羟基苯甲酸、对甲苯甲酸等化合物。试验发现，对甲苯甲酸作为内标物比较合适，且分析纯的对甲苯甲酸已满足要求。
2.3 检测波长的选择
以乙腈为参比，将2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺于紫外可见光谱仪上在400nm～190nm范围内进行扫描。发现其在270 nm～230 nm内有较强的紫外吸收，可以根据需要在此范围内任意选择检测波长，考虑到2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺与内标物的相对灵敏度和线性范围，我们选择通用波长254nm为其紫外检测波长。如图1为2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺试样与内标物分离色谱图。
图1 试样与内标物分离色谱图
A— 对甲苯甲酸
B— 2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺
色谱条件：Zobax Eclipse XDB C8 4.6mmID×150mm，0.3%HAc水溶液/乙腈=53：47，1ml/min，254nm，40℃
2.4 线性关系
分别准确地配制含2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺和对甲苯甲酸40、80、160、240、320、400（μg /mL）的标准系列，各进样5μL，将峰面积（Y）与进样量（X）之间进行线性回归处理，分别得到以下回归方程：
2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺，y=1462.6x+60.6（r=0.9999）；
对甲苯甲酸，y=1824.2x+113.3（r=0.9999）。
结果表明，2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺和对甲苯甲酸进样量在0.2～2μg范围内均呈良好的线性关系。本试验选用2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺为1μg，为了使内标物与2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺峰面积相近，对甲苯甲酸进样量为0.8μg。
2.5 测定结果及样品加入回收试验
采用本方法测定工业品2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺，并对样品进行了加入回收试验结果见表1、表2。
可见此方法可以满足工业品2-乙酰基-N-（5-硝基噻唑）苯甲酰胺含量测定的分析要求。
表1 测定结果
测定结果，% 平均值，% 标准偏差，% 相对标准偏差，%
98.82 98.41 98.8098.69 98.74 98.7898.68 98.59 98.58 98.68 0.13 0.13
表2 加入回收试验
样品量，g 加入标准品，g 实际测得值，g 回收质量，g 回收率，%
0.0676 0.0342 0.1012 0.0345 100.83
0.0872 0.0154 0.1013 0.0152 98.70
0.0646 0.0306 0.0940 0.0302 98.84
0.0268 0.0672 0.0934 0.0670 99.63
0.0724 0.0270 0.0986 0.0272 100.58
作者：
2007-5-18