摘要 目的：建立测定复方荔枝草颗粒剂中高车前苷含量的高效液 相色谱法。方法：以KF-C18(250 mm×4.6 mm,10 μm)为分析柱，流动相为甲醇- 水-pH 3.5的1.0 mol.L-1磷酸盐缓冲液(40∶55∶5）；柱温为45℃；检测波长 为335 nm；流速为1.0 mL.min-1，采用面积外标法。 结果：线性范围3.12×10-3～0.20 μg，平均回收率为96.96%～ 101.5%，RSD＜0.69%(n=3)。 结论：本法简便、灵敏、重现性好，可用于测定该颗粒剂高车前苷的含量和质 量标准的控制。
关键词 高车前苷 复方荔枝草颗粒剂 高效液相色谱
Determination of Homoplantaginin
in Compound Salvia plebeia Granules by HPLC
Wu Zhenghong,Pei Yunping,Fang Yun and Chen Zhiyi
(The Clinical Pharmacological Department of the Drum Tower Hospital Att ached to the
Medical College of Nanjing University,Nanjing 210008)
Abstract Objective：To establish a HPLC method for the determi nation of homoplantaginin in compound Salvia plebeia granules.Method s:Chromatographic conditions were as follows:analytical column of KF-C 18(250 mm×4.6 mm,10 μm)，mobile phase of methanol-water-1.0 mol.L -1，pH 3.5 phosphate buffer(40∶55∶5），column temperature at 45℃，d etective wavelength at 335 nm，1.0 mL.min-1 of flow rate.The external st andard method was used. Results:The standard curve was linear in the range of 3.12×1 0-3～0.20 μg，the average recovery was 96.96%～101.5%，and RSD w as less than 0.69%(n=3). Conclusion:The method is simple,sensitive,and highly reproducibl e.The content of homoplantaginin in the granules was determined by the method an d quality standard of the granules was formulated.
Key words homoplantaginin,compound Salvia plebeia granules ,HPLC
复方荔枝草颗粒剂主要由荔枝草(Salvia plebeia R.Br.)、车前草( Plantago asiatica L.)和六月雪［Serissa serissoides(DC.)Druce］等多味中 药组成，具有清热解毒、利尿通淋之功效。方中主药荔枝草和车前草具有利尿、清热和消肿 等作用［1，2］，且都含有黄酮苷类化合物高车前苷［3，4］。为了控制
制剂质量， 对高车前苷进行定量分析，本文采用反相高效液相色谱法测定，该法准确、灵敏、稳定性好 。
1 仪器与试药
岛津LC-10A高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器，C-R7A数据处理机。
高车前苷对照品(含量98%以上，上海医药工业研究院提供)；复方荔枝草颗粒剂(南京大学医 学院附属鼓楼医院生产)；甲醇为色谱纯，磷酸、磷酸二氢钾等均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：KF-C18(4.6 mm×2 50 mm,10 μm)；紫外检测波长：335 nm；流动相：甲醇-水-pH 3.5的1.0 mol.L-1磷酸盐缓冲液(磷酸二氢钾68.05 g，加水适量，溶解，再加入磷酸1.6 m L，然后用水稀释至500 mL)(40∶55∶5）；柱温：45 ℃；流量：1.0 mL.min -1；纸速：2 mm.min-1。
2.2 高车前苷标准曲线 精密称取高车前苷对照品适量，加入甲醇溶解 后，稀释成0.2 mg.mL-1的溶液，再用流动相将此溶液稀释，配制浓度为10.00，5 .00，2.50，1.25，0.625，0.312，0.156 μg.mL-1的对照品溶液，精密量取 20 μL进样，按上述条件测定。用色谱峰面积(Y）对高车前苷浓度(X)作图，得到 工作曲线，其回归方程：
Y=33 082.50X-1 026.33 r=1.000 0
在0.156～10.00 μg.mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.3 样品测定 取复方荔枝草颗粒剂研碎，精密称取约1.0 g，置于磨 口锥形瓶中，精密加入60%乙醇10 mL，称重，置超声振荡器中超声1.5 h，冷却后，再称 重，补加60%乙醇至原重，过滤，弃去初滤液，收集续滤液，精密量取滤液1.0 mL置于25 m L量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，进样分析。按外标法，以峰面积计算高车前苷含量 ，结果3批样品含量分别为0.451，0.512，0.711 mg.g-1,RSD分别为0.84% ，0.81%，0.75%(n=3)。色谱图见图1。
图1 高效液相色谱图
A.高车前苷对照品 B.复方荔枝草颗粒剂提取液
C.复方荔枝草颗粒剂提取液+高车前苷对照品
1.高车前苷(16.6 min)
2.4 回收率试验 取已知高车前苷含量的复方荔枝草颗粒剂研碎，精密 称 取约1.0 g，共3份，于每份中分别加入0.5，1.0，3.0 mL浓度为221.2 μg.mL-1 的高车前苷对照品溶液(溶媒为60%乙醇)，再分别补加60%乙醇9.5，9.0，7 mL，按样品 测定项下操作，制成3种不同浓度的供试液，每一浓度重复3次，计算高车前苷含量和回收率 ，结果回收率为96.96%～101.5%，RSD＜0.69%。
2.5 精密度试验 以高、中、低3种不同浓度的高车前苷对照品溶液， 按标准曲线测定项下操作，考察1 d内和1周日间峰面积变异性(n=5)，结果日内RSD ＜3.3%，日间RSD＜4.7%。
2.6 重复性考察 取复方荔枝草颗粒剂研碎，精密称取约1.0 g，按样 品测定项下操作，制取供试液5份，进样测定，每一份重复3次，计算复方荔枝草颗粒剂中高 车前苷含量，结果平均含量为0.507 mg.g-1，RSD为2.3%(n=15)。
2.7 不同提取法对高车前苷提取率的影响 取复方荔枝草颗粒剂研碎， 称取适量，共3份，以60%乙醇为溶媒，分别采用索氏法、超声法和回流提取法，提取1.5 h ，然后测定， 并计算复方荔枝草颗粒剂中高车前苷含量，结果表明采用超声法提取效果最 佳。
2.8 不同溶媒对高车前苷提取率的影响 取复方荔枝草颗粒剂研碎，精 密称取约1.0 g，共7份，分别以甲醇、水及50%，60%，65%，70%，95%乙醇为溶媒超声提取 ，然后按样品测定项下操作，制取供试液，进样测定，计算复方荔枝草颗粒剂中高车前苷含 量，结果表明以60%乙醇为溶媒超声提取效果最佳。
3 讨论
3.1 本文采用超声法对高车前苷提出率最佳，并简化了 提取操作过程。超声波振动的空化、机械粉碎、搅拌等作用，有利于化学溶媒渗入被提物质 内部，加速有效成分进入溶媒中，促进有效成分的提取，从而提高了有效成分的提出率。
3.2 用不含荔枝草和车前草提取物制成的空白样品，按本法进行测定， 在高车前苷色谱图相应的位置上无峰，对高效液相色谱测定结果没有干扰。
吴正红（南京大学医学院附属鼓楼医院
临床药理室 210008）
裴云萍（南京大学医学院附属鼓楼医院临床药理室 210008）
方芸（南京大学医学院附属鼓楼医院临床药理室 210008）
陈志一（南京大学医学院附属鼓楼医院临床药理室 210008）
参考文献
1，中国医学科学院药用植物资源开发研究所，中国医学科学院药物研究 所等编.
中药志.第二版(第四册).北京：人民卫生出版社，1988.542
2，中国药典.1995.一部：53
3，蒋毅，罗思齐，郑民实.荔枝草活性成分的研究.医药工业，1987，18(8)：3 49
4，肖崇厚主编.中药化学.第一版.上海：上海科学技术出版社，1988.194
(本文于1999年8月26日收到)
作者：
2007-5-18