维生素是维持人和动物正常生理所必须的营养物质，人和动物对维生素的需求虽然不大，其作用却非常显著。由于人和动物体内均不能合成维生素，必须依赖食物和饲料来提供足够的维生素，因此,对食物和饲料中维生素的评价十分重要。近年来，由于饲料工业的发展，多维和预混合饲料产品越来越多，导致了对维生素快速分析方法的需要，高效液相色谱法为维生素的测定提供了一种快速可靠的方法。１材料与方法１.１仪器与试剂ＨＰＬＣ为美国Ｗａｔｅｒｓ高效液相谱仪，Ｍｉｌｌｅｎ ｎｉｕｍ操作系统并备７１７ｐｌｕｓ自动进样器和６００Ｅ高压泵，备有４８６紫外可调波长检测器。甲醇为优级纯,水为超纯水,三乙胺为分析纯,冰醋酸为分析纯。ＰＩＣＢ６（己烷磺酸钠），每瓶２０ｍｌ（天津化学试剂二厂）或ＨＰＬＣ级，Ｅａｓｔｍａｎ-ｋｏｄａｋ（ＲｏｃｈｅｓｔｅｒＮＹＵ·Ｓ·Ａ）。１.２色谱条件色谱柱：反相Ｃ１８柱。流动相：取５００ｍｌ超纯水，加１０ｍｌ冰醋酸，１３ｍｌ三乙胺，０.００５ｍｏｌ／ｌ己烷磺酸钠（或加１小瓶己烷磺酸钠），用超纯水定容至１０００ｍｌ，此时ｐＨ为３ ２，过０.４５滤膜。取上述溶液８５０ｍｌ与１５０ｍｌ甲醇混合，脱气。柱温：２６℃流速：１ｍｌ／ｍｉｎ检测波长：２７５ｎｍ或２５４ｎｍ１ ３提取液取５００ｍｌ超纯水，加１０ｍｌ冰醋酸，１ ３ｍｌ三乙胺，用超纯水定容至１０００ｍｌ，此时ｐＨ为３.２，过０.４５滤膜。取上述溶液８５０ｍｌ与１５０ｍｌ甲醇混合。１.４标准配制１.４.１称取经过干燥的烟酸、烟酰胺、ＶＢ６、ＶＢ１、ＶＢ２及ＶＣ标准品（ＵＳＰｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓｔａｎｄａｒｄ）各２５ｍｇ置于２５０ｍｌ棕色瓶中，用流动相定容至刻度，在棕色瓶中，冰箱保存可放置１周。１.４.２称取经过干燥的叶酸２５ｍｇ置于２５０ｍｌ容量瓶中，用０.１Ｍ碳酸钠溶解，调至ｐＨ７.０，定容。将上述两种溶液各吸１０ｍｌ，用流动相稀释至５０ｍｌ或１００ｍｌ，上机，该混合标准置于带盖小瓶中，可在室温状态下保存１天，但是ＶＣ溶液会迅速遭到破坏。１.５样品制备称取０ .２５ｇ～０．５ｇ多维和预混料（视含量而定），置于１００ｍｌ棕色容量瓶中，加７０ｍｌ提取液，振荡，超声提取１０ｍｉｎ，定容至刻度，过滤，上机。２结果讨论测定水溶性维生素的方法很多，本试验介绍了同时测定７种水溶性维生素的试验条件和测定方法。采用自动进样器，分别考查了复合水溶性维生素标准，连续８次进样的保留时间和峰面积的重要性（见下表）。表进样的保留时间和峰面积的重要性保留时间（ｍｉｎ）峰面积变异系数（ＣＶ%）ＶＣ１．２５０±０．０００９．８烟酸１．４１７±０．００００．５１烟酰胺１．７１７±０．０１７０．５２ＶＢ６２．４１７±０．００００．５５叶酸３．３３３±０．００００．４７ＶＢ１４．５１７±０．０１３０．３９ＶＢ２７．２５０±０．０１７０．７７抗坏血酸峰面积的变异系数为９ ８%，这可能由于水溶液迅速氧化引起。该方法不会对色谱柱造成影响,但应注意,ＶＢ２溶解度在２５℃时约为７ｍｇ／１００ｍｌ，叶酸溶解度在０℃时约为１ｍｇ／１００ｍｌ。高效液相谱法测定多维和预混料中的水溶性维生素
化验与检测
作者：
2007-5-18