复方地西泮片中3种成分含量测定的改良研究

［摘要］目的：对复方地西泮片中3种成分的含量测定进行改良研究。方法：地西泮由系数倍率法改为HPLC法；谷维素仍用UV法，溶剂由正庚烷改为硫酸乙醇；维生素B₁由硅钨酸沉淀法改为UV法。结果：方法的平均加样回收率（n=5）分别为100.6%（地西泮），99.7%（谷维素）与100.7%（维生素B₁）；相对标准偏差(RSD)分别为0.64%，1.06%与1.32%。结论：所拟方法比原方法快速、简便、准确，能有效地控制该产品的质量。
［关键词］　复方地西泮片；谷维素；维生素B₁；地西泮；含量测定
［中图分类号］R927.11；R971.4　　［文献标识码］B　　［文章编号］1003-3734(2000)09-0615-04

Innovation in determination of co-diazepam tablets

WANG Jie　RAN Xiao-jing
（Institute for Drug Control of Shandong Province,Jinan 250012,China）
DING Jie
（Institute of Pharmaceutical Industry of Shandong Province, Jinan 250100,China）

［Abstract］Objective:To improve method for determining components of co-diazepam tablets.Methods:Determination method for diazepam and vitamin B₁ were changed from coefficient rate and silicotungstic acid precipitation to HPLC and UV respectively.The solvent for UV determination of oryzanol was changed from n-heptane to a mixture of sulfuric acid and ethanol.Results:The mean recovery(n=5)is 100.6% for diazepam;100.7% for vitamin B₁ and 99.7% for oryzanol.Conclusion:A simpler,more rapid,and accurate method for determination of components of co-diazepam was obtained in comparison with the original method.
［Key words］　co-diazepam tablets；oryzanol；vitamin B₁；diazepam；assay

　　复方地西泮片(原名谷维安片)含谷维素、维生素B₁与地西泮，为国家三类新药。主要用于治疗各类神经官能症、植物神经失调等症。我们拟出了快速、简便、准确的测定复方地西泮中3种成分含量的方法，结果令人满意，报告如下。

材料与方法

1　仪器与试药
　　岛津UV2201、UV3000紫外分光光度计；SP-8800高效液相色谱仪，Spectra 200型UV检测器，4400积分仪；甲醇为优级纯，其他试剂均为分析纯。地西泮对照品（中国药品生物制品检定所）、谷维素、维生素B₁、安替比林均为已知含量的原料药。样品为济宁安康制药厂委托送验样品。
2　方法
2.1　地西泮的含量与含量均匀度测定　曾采用系数倍率法进行测定，由于地西泮在样品中含量少(1.25mg)，比例小(分别为谷维素的1/40与维生素B₁的1/10),测定误差较大,含量限度仅定为标示量的85.0%～115.0%; 我们试用HPLC法,以安替比林为内标,使地西泮分离于其他物质后进行定量,精度高,结果准确,含量测定限度提高为标示量的90.0%～110.0%。
　　色谱柱：C₁₈，5μm，25cm×0.46cm；流动相：甲醇-水(75∶25)，用前用0.45μm滤膜滤过，抽滤并电磁搅拌以除气；流速：0.85ml/min；检测波长230nm；衰减64；进样量5μl。
　　线性关系的考察：精密称取地西泮对照品约12.5mg, 置50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，混匀，作为对照溶液；另取安替比林约0.2g,精密称定，置200ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，混匀，作为内标溶液。
　　精密量取对照溶液2，4，6，8，10ml，分别置25ml量瓶中，各精密加入内标溶液3ml,用流动相稀释至刻度，混匀。取各浓度分别4次注入液相色谱仪，以对照品与内标的峰面积比为纵坐标，以对照品浓度为横坐标，进行线性回归，得回归方程:Y=0.02943＋0.02289X,r=0.9999, 地西泮在0.1～0.5μg范围内线性关系良好。
　　含量均匀度测定：取本品1片，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液3ml与流动相适量，超声处理后用流动相稀释至刻度，混匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液5μl注入液相色谱仪，照以上方法进行色谱分析，色谱图见图1。

图1　复方地西泮片色谱图

　　含量测定：取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于地西泮1.25mg)，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液3ml与流动相适量，超声处理，以下照含量均匀度方法测定并计算。
　　回收率试验：取上述已知含量的复方地西泮片粉（批号940318）为基底，加入地西泮对照品适量，照含量测定方法测定加样回收率。
2.2　谷维素的含量测定　曾以正庚烷为溶剂提取后用紫外分光光度法测定含量。正庚烷溶剂膨胀系数大，结果稳定性较差，而且价格较贵。
　　我们参照资料^［1］ ，试用价廉的0.5%硫酸乙醇溶液为溶剂，在200～400nm的波长范围内扫描，在其最大吸收波长处(327nm),维生素B₁无吸收，地西泮虽有吸收，但由于量少悬殊，并不影响测定，见图2，故选此波长作为测定波长。

1 谷维素；2 维生素B₁；3 地西泮；4 辅料
图2　处方比例的谷维素与其他药品及辅料的紫外吸收图

　　用0.5%硫酸乙醇溶液制成含谷维素10～20μg/ml系列浓度的标准溶液，在327nm波长处测定其吸收度，得回归方程：A=0.0287+0.0357C,r=0.9999,线性关系良好。
　　含量测定：精密称取地西泮项下的细粉适量(约相当于谷维素35mg) ，置100ml量瓶中，加0.5%硫酸乙醇溶液适量，超声处理后，用0.5%硫酸乙醇溶液稀释至刻度，混匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2ml。置50ml量瓶中，用0.5%硫酸乙醇溶液稀释至刻度，混匀，在327nm波长处测定吸收度。
　　回收率试验：取上述已知含量的复方地西泮片粉（批号940318）为基底，加入谷维素适量，照含量测定方法测定加样回收率。
2.3　维生素B₁的含量测定　曾采用硅钨酸沉淀法进行测定，专属性高，结果可靠准确，但操作费时、繁杂。如套用中国药典维生素B₁片的测定方法^［2］ ，地西泮在盐酸溶液(1→1 000) 中溶解，干扰测定。我们利用它们在水中溶解度的差异(维生素B₁易溶，地西泮几乎不溶，谷维素不溶^［2～4］），先以水提取维生素B₁后，再以盐酸溶液稀释，照药典方法进行测定，排除了干扰，其紫外吸收图见图3，结果准确，操作方便。

图3　维生素B₁与其他药品及辅料的紫外吸收图

　　含量测定：精密称取地西泮含量测定项下的细粉适量(约相当于维生素B₁ 50mg)，置100ml量瓶中，加水适量，振摇使维生素B₁溶解，用水稀释至刻度，混匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液稀释至刻度，混匀，在246nm的波长处测定吸收度。
　　回收率试验：取上述已知含量的复方地西泮片粉（批号940318）为基底，加入维生素B₁适量，照含量测定方法测定加样回收率。

结　　果

1　地西泮的含量、含量均匀度及回收率试验
　　见表1，表2，表3。

表1　地西泮的含量均匀度测定结果

表2　地西泮的含量测定结果

表3　地西泮加样回收率的实验结果

表4　谷维素的含量测定结果(标示量％)

表5　谷维素加样回收率的实验结果

表6　维生素B₁的含量测定结果(标示量％)

表7　维生素B₁加样回收率的实验结果

　　本品中地西泮的HPLC测定曾有报道^［5］，测定波长为292nm，流动相为乙腈-甲醇-水(35∶103∶48，用乙腈为“降低压力”),峰高比定量。本实验改用75%甲醇作流动相，降低费用，工作压力并不高(仅约1 300 psi)，测定波长改用地西泮的最大吸收波长230nm,提高测定灵敏度，并未发现“影响测定的负峰”，以峰面积比定量。
　　谷维素为以环木菠萝醇类为主体的阿魏酸酯的混合物^［4］，不溶于水，在甲醇中微溶，理化性质与维生素B₁相差甚远，所以不可能如报道^［5］ 所述在色谱图前部紧挨维生素B₁出峰，而可能为所加内标己烯雌酚的分解产物。我们曾以甲醇为流动相，流速为1ml/min进行实验，结果谷维素在18～30 min出一复峰，与预测相吻合。因此，为减少谷维素进入色谱柱，难以洗出，以流动相(75%甲醇) 溶解样品，可降低试液中谷维素的浓度。这样，谷维素在实验条件下出峰时间约在4h后，仅使基线稍呈波动，不影响测定。待实验结束后，用甲醇充分冲洗色谱柱即可。
　　内标物质改用安替比林，保留时间比样品短3min，可保证日后充分分离。
　　谷维素改用硫酸乙醇溶液，结果准确，费用降低，方便实用。但所得回归方程与报道^［1］相差甚远，所测吸收系数（E^1%_1cm）与其报道基本一致。经计算，认为该报道回归方程有误^［6］。而且应避光操作，否则含量很快下降。维生素B₁改用提取UV法，方便、迅速、准确，但加水放置3h后，再滤过测定时，发现含量会高出3%～5%，可能由于在水中难溶的地西泮或谷维素有缓慢溶出的现象，只要及时测定或及时滤除不溶物，即可避免上述情况。

作者简介：王杰(1958-)，男，副主任药师，从事药品检验、仪器分析工作。联系电话：(0531)6923349。
王杰（山东省药品检验所, 济南　250012）
丁洁（山东省医药工业研究所,济南　250100）
冉晓静（山东省药品检验所, 济南　250012）

参考文献

［1］　朱碧君，田慧. 改良紫外分光光度法测定谷维素片的含量及含量均匀度［J］．药物分析杂志, 1994，14(2)∶43-44.
［2］　中国药典［S］.二部.1990．634.
［3］　中国药典［S］.二部.1990．189.
［4］　卫生部药品标准［S］.化学药品及制剂第一册,1989．55.
［5］　刘贵银，刘丽敏. HPLC法测定谷维安片中安定的含量均匀度［J］．药物分析杂志, 1991，11(4)∶240-241.
［6］　王杰. 与“改良紫外分光光度法测定谷维素片的含量及含量均匀度”一文的一点商榷［J］．药物分析杂志,1995，15(4)∶53-54.

收稿：2000-05-23
修回：2000-07-12