高效液相色谱法测定环丙贝特及其有关物质的含量

　　［摘要］目的：本实验采用高效液相色谱法测定环丙贝特及其有关物质的含量。方法：色谱柱为C₁₈柱（4.6mm×150mm,5μm），流动相为0.01mol/L醋酸铵［pH为（3.8±0.1）］-乙腈（1∶1），检测波长为230nm。结果：线性浓度范围为0.02～0.2mg/ml，平均回收率为(100.6±0.6)%（n=5），精密度RSD为0.7%。结论：方法简便、快速、准确。
　　［关键词］环丙贝特；有关物质；高效液相色谱法；含量测定
　　［中图分类号］R927.2　　［文献标识码］B
　　［文章编号］1003-3734(2000)11-0770-02

Determination of ciprofibrate and its related substances by HPLC

WANG Jun-qiu,ZHANG Jie-ping,ZHANG Han,YU Li
(Beijing Institute of Drug Control,Beijing 100035,China)

［Abstract］Objective:To establish a HPLC method for determination of ciprofibrate and its related substances in tablets.Methods:A C₁₈ column(4.6mm×150mm,5μm),a mobile phase consisting of 0.01 mol/L ammonium acetate solution (pH was adjusted to 3.8±0.1 with acetic acid)∶acetonitrile=1∶1 and a UV detector at 230 nm were adopted.Results:The established method has a linear limit of 0.02～0.2 mg/ml,a mean recovery of ciprofibrate of (100.6±0.6)%(n=5) and a RSD of 0.7%.Conclusion:A simple,rapid,and precise HPLC method for determination of ciprofibrate and its related substances was established.
［Key words］ciprofibrate;related substance;HPLC;determination

　　 环丙贝特(ciprofibrate)是用于降血脂的药品，原质量标准中含量测定及有关物质的测定均采用HPLC法^［1］，但采用不同的流动相。现经实验，对流动相进行了改进，改进后的方法可同时测定含量及有关物质，方法简便准确。

材料与方法

1　仪器
　　SP8800型高效液相色谱仪检测器SP200（美国光谱物理公司），色谱柱ALLTIMA C₁₈柱（Alltech公司）；UV-265紫外分光光度仪（日本岛津公司）。
2　试药
　　醋酸铵、醋酸为分析纯，乙腈为色谱纯；对照品：环丙贝特（100.0%）、环丙贝特甲酯（99.9%）、环丙贝特乙酯（99.9%）（法国赛诺非公司）；供试品：环丙贝特片（法国赛诺非公司生产，批号为1NN236，2NN291，3NN237）。
3　色谱条件
　　色谱柱：C₁₈（4.6mm ×150mm，5μm）；流速：1.0ml/min；柱温：室温；检测波长：230nm。
4　方法
4.1　测定波长的考察　用流动相将环丙贝特、环丙贝特甲酯、环丙贝特乙酯制备成品溶液，在200～400nm进行紫外扫描^［1］，结果均在230nm处有最大吸收，故选择230nm 作为检测波长。
4.2　线性范围　精密称取环丙贝特对照品50mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，分别精密量取1.0，2.5，5.0，7.5，10.0ml置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，使成0.02，0.05，0.10，0.15，0.20mg/ml的溶液，依上述色谱条件测定，以面积对浓度计算回归方程，C＝2.95×10^-8A－2.56×10^-5，r=0.9999，结果表明在0.02～0.2mg/ml范围内有良好的线性关系。
　　精密称取环丙贝特甲酯对照品适量，加流动相溶解并稀释成浓度为0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0μg/ml的溶液，依上述色谱条件测定，以面积对浓度计算回归方程，C＝2.82×10^-5A+8.64×10^-2，r=0.9997，结果表明在0.5～8.0μg/ml范围内有良好的线性关系。
　　精密称取环丙贝特乙酯对照品适量，加流动相溶解并稀释成浓度为0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0μg/ml的溶液，依上述色谱条件测定，以面积对浓度计算回归方程，C＝3.19×10^-5A+7.31×10^-2，r=0.9997，结果表明在0.5～8.0μg/ml范围内有良好的线性关系。
4.3　回收率试验　采用加样回收法^［2］，平均回收率为(100.6±0.6)%（n=5)。
4.4　精密度试验　取一份供试品溶液，重复进样5次，结果精密度良好， RSD＝0.7%。
4.5　重现性试验　取同一批样品5份，按上述方法进行含量测定，结果重现性良好，重现性试验RSD为1.1% 。
4.6　环丙贝特甲酯和环丙贝特乙酯校正因子的测定^［3］　取环丙贝特及环丙贝特甲酯和环丙贝特乙酯对照品适量，加流动相稀释成2μg/ml的溶液，依上述色谱条件测定，每种溶液各进样5次，计算环丙贝特甲酯和环丙贝特乙酯平均峰面积与环丙贝特平均峰面积的比值，结果比值均为1.0。
4.7　两方法的对比试验　取3批样品分别按原厂方含量测定方法及现含量测定中方法测定。

结　　果

1　含量测定
　　取本品10片，精密称定适量（相当于环丙贝特20mg），置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释刻度，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为样品溶液。另取环丙贝特对照品适量，加流动相溶解并稀释成0.1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。精密吸取各10μl注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算，即得。结果3批样品间含量无显著差异，见表1。

表1　3批样品含量测定比较

讨　　论

　　因经测定环丙贝特甲酯与环丙贝特乙酯的校正因子均约为1.0，故修订后的标准不再采用环丙贝特甲酯与环丙贝特乙酯外标法测定有关物质，而采用样品的自身对照法测定^［2］。
　　乙腈对环丙贝特、环丙贝特甲酯、环丙贝特乙酯色谱行为的影响：保持醋酸铵浓度及pH值不变，改变乙腈的比例，结果表明乙腈的比例对环丙贝特、环丙贝特甲酯、环丙贝特乙酯保留时间影响较大，但当其比例为60%时，环丙贝特与主峰前杂质的峰的分离度降低，而当其比例为40%时，杂质的保留时间过长。
　　醋酸铵浓度对环丙贝特、环丙贝特甲酯、环丙贝特乙酯色谱行为的影响：保持乙腈浓度及pH值不变，改变醋酸铵的浓度，结果醋酸铵浓度增大或减少均会使环丙贝特与主峰前杂质的峰的分离度降低。
　　pH值对环丙贝特、环丙贝特甲酯、环丙贝特乙酯色谱行为的影响：保持乙腈及醋酸铵浓度不变，改变流动相的pH值，结果pH值无论增大或减少，环丙贝特甲酯、环丙贝特乙酯的出峰时间均延长。

［作者简介］王俊秋(1964-)，女，副主任药师，药学学士，从事药品检验工作。
王俊秋(北京市药品检验所，北京　100035)
张洁萍(北京市药品检验所，北京　100035)
张寒(北京市药品检验所，北京　100035)
余立(北京市药品检验所，北京　100035)

［参考文献］

［1］卫生部药政局、中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范［S］.北京：中国医药科技出版社，1996.65-66.
［2］王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究［M］.北京：中国医药科技出版社，1994.28-29 .
［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典.2000版二部［S］.北京：北京化学工业出版社，2000.附录32-34,191-193.

收稿日期：2000-03-27

修回日期：2000-08-23