反相高效液相色谱测定山地明滴眼液的含量

　　［摘要］　目的：采用反相高效液相色谱测定山地明滴 眼液中环胞素的含量。方法：以RP-C₁₈柱(10μm,4.6mm× 200mm)为分析柱，乙腈-水-甲醇-磷酸(50∶40∶5∶0.05)为流动相，检测波长210nm,流 速1.5ml/min，柱温50℃。结果：平均回收率为100.6%(n＝5 )，RSD ＝0.5%。结论：该方法快速、准确、重现性好。
　　［关键词］　环胞素；山地明滴眼液；反相高效液相色谱
　　［中图分类号］R927.2　　［文献标识码］ B　　
［文章编号］1003-3734(2000)10-0697-03

Determination of ciclosporin in Sandimmin eye drops by RP -HPLC

LU Jing-guang　LUAN Cheng-zhang　HUA Yu-qin　WANG Li　SU Jie
（Qingdao Institute for Drug Control,Qingdao 266071,China）

［Abstract］　Objectives:Determination of ciclosporin in Sandimmin eye drops.Medhods:A RP-C₁₈ column(10μm,4.6mm×200mm),a mo bile phase consisted of acetonitile∶H₂O∶methanol:phosphoric acid(55∶40∶5∶ 0.05)and a UV detector of 210 nm were adopted with a flow rate of 1.5ml/min and a column temperature of 50°C.Results:A mean recovery of 100.6%( n=5)and a RSD of 0.5% were obtained.Conclusions:A simple,rapid,a nd accurate method for determination of ciclosporin in Sandimmin eye drops is wo rked out with a good reproducibility.
　　［Key words］　cyclosporin;Sandimman eye drop;RP-HPLC

　　山地明滴眼液是一新型眼科制剂，以环胞素为主要有效成分，维生素AD油溶 液为基质，用于角膜移植后的抗排斥反应。我们建立了山地明滴眼液含量的反相液相色谱法 ，现报告如下。

实验材料

　　日本岛津LC-10AD高效液相色谱仪；SPD-10A紫外检测器；DGU-4A脱气装置；CTO-10A柱 温箱；BECKMAN 427型积分仪；手动进样，进样环体积20μl。
　　甲醇(光学纯，上海振兴化工一厂)；氯仿及磷酸(分析纯，青岛化学试剂厂)；重蒸馏水。
　　环胞素对照品(纯度100.3%，瑞士SANDOZ.LTD);山地明滴眼液(含量1.0%，山东省眼 科医院)。

方法与结果

1　色谱条件
　　色谱柱：Accusil C₁₈(10μm,4.6mm×200mm);流动相：乙腈-水-甲醇-磷酸(55∶4 0∶5∶0.05)；检测波长210nm；流速1.5ml/min;柱温：50℃；灵敏度：0.2AUFS；纸速 ：0.1cm/min；进样量：20μl。本色谱条件下测得环胞素的保留时间为16.5min,理论塔板数 大于1 500。
2　线性考察及标准曲线
　　精密称取环胞素对照品100mg，置25ml量瓶中，用甲醇-氯仿(4∶1)的混合液稀释至刻度， 摇匀，作为对照品溶液。精密量取此溶液1.5，3.0，6.0，12.0ml分别置25ml量瓶中，用流 动相稀释至刻度，摇匀，各分取20μl依次注入色谱仪，以上述色谱条件进行测定。以对照 品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程为：Y＝346492X+1975，r＝1.0000。结 果表明，环胞素在0.24～4.00mg/ml范围内呈良好线性。
3　加样回收试验
　　精密量取环胞素2ml,按处方配比加赋型剂，最后加维生素AD注射液至20.0ml，混匀，作为模 拟样品液。精密量取上述溶液2ml，共5份，分别置25ml量瓶中，各加入环胞素对照 品溶液(4.0mg/ml)3.0ml,用流动相稀释至刻度，摇匀，过滤。取滤液20μl注入 色谱仪，按上述 色谱条件进行测定，按外标法，以峰面积计算回收率，测得环胞素平均回收率为100.6%(n ＝5)，RSD为0.65%。
4　样品测定
　　精密量取山地明滴眼液2ml,置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取滤液及环 胞素对照品溶液(0.8mg/ml)各20μl依次注入色谱仪，按上述色谱条件进行测定，按外标法 计算含量。见图1和表1。

图1　环胞素HPLC色谱图
A.环胞素对照品　B.山地明滴眼液

表1　山地明滴眼液含量测定结果　(n＝ 5，±s)

　　本研究采用高效液相色谱法，以外标法测定山地明滴眼液中环胞素的含量，可将基质维生素 AD油溶液的干扰除去，样品测定结果重现性良好。样品液及对照品液在0，4，8h(室温放置) 测定，其峰面积值基本不变，故测定可在8h内进行。
　　该法进样量少，方法简单，灵敏度高，结果准确，变异性小，为山地明滴眼液的含量测定提 供了可行的方法。

［作者简介］　卢京光(1968-)，女，主管药师，主要从事药品标准 的研究工作。联系电话：(0532)5735385。
卢京光（青岛市药品检验所，青岛 266071）　
栾成章（青岛市药品检验所，青岛 266071）　
华玉琴（青岛市药品检验所，青岛 266071）　
王立（青岛市药品检验所，青岛 266071）　
宿洁（青岛市药品检验所，青岛 266071）

【参考文献】

［1］　马剑文，韩永平，沈克温.现代药品检验学［M］.北京：人民军医出版社，1 994.225-232.

(收稿；2000-02-25)