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（中南大学湘雅医院药剂科）
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摘要 目的：建立测定西蒙叶中有效成分含量的方法，比较不同年份的西蒙叶中咖啡酸的含量差异。方法：运用反相高效液相色谱法，对西蒙叶中咖啡酸的含量进行测定。结果：咖啡酸在10.33-165.28μg/ml范围内，具有良好的线性关系，r为0.9998，平均回收率为99.38±1.36%。结论：该方法灵敏、准确、专属性强，适用与样品中咖啡酸的测定。
关键词：西蒙叶 咖啡酸 高效液相色谱 .西蒙（引种巴西甘薯）干叶，为旋花科植物甘薯属药用甘薯Ipomoea batatas
Lam 之干燥叶片。该植物从巴西引种至我国，先后在我国北京、徐州、湖南、四川等地种植，主要作药用。临床用于治疗血小板减少性症、糖尿病及抗肿瘤具有较好的疗效[1]。文献报道西蒙可增强免疫功能[2]。本文报道采用HPLC法测定西蒙干叶中咖啡酸的含量，同时，为考察贮存年限是否对药材中咖啡酸含量有影响，对最近三年（97、98、99）药材中咖啡酸的含量进行了测定。
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| 1 仪器与试剂 HP1050液相色谱仪（美国惠普公司），紫外检测器（美国惠普公司），色谱柱采用Hypersil-ODS
C18 柱（粒径5μm），咖啡酸标准品（上海化学试剂一厂提供），西蒙叶，其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1色谱条件
色谱柱：Kromasil C18 ,φ4.6mmΧ200mm（粒径5μm）,柱温：30℃，流动相:甲醇：1％HAc水溶液（35:65），流速：1.0ml/min，检测波长：318nm，进样量：5μl。
2.2对照品溶液的制备 精密称取10.33mg咖啡酸（C.A）标准品，置10ml量瓶中加适量甲醇使之溶解，并稀释到刻度，摇匀，作为贮备液（每1ml含咖啡酸1.033mg）.
2.3标准曲线 精密吸取以上咖啡酸贮备液（1033μg/ml）0.1, 0.2, 0.4, 0.8,1.6ml,置于10ml量瓶中，用甲醇稀释到刻度，摇匀，分别进样5μl，以峰面积与对应浓度（μg/ml）绘制标准曲线。 |
| 回归方程：Arsp=2080C-4810 (r=0.9998)
2.4样品溶液的制备 分别精确称取97、98、99年西蒙叶粗粉10g置于200ml圆底烧瓶中，精密加入甲醇100ml，回流，称重，冷却，用甲醇补足损失重量，用微孔滤膜过滤
，取续滤液10ml置于10ml量瓶中，备用。 2.5测定 取样品溶液5μl，注入液相色谱仪测定，按此含量测定方法，测定三批样品。
2.6仪器精密度试验 取浓度为10.33μg/ml的咖啡酸标准溶液，重复进样5次，每次进样5μl，咖啡酸峰面积积分值的RSD为0.9788%。
2.6回收率试验 取已知含量的西蒙叶6份，分别精密加入咖啡酸对照品，同前法制成供试液，每次进样5μl，并测定其咖啡酸的含量,计算加样回收率。
2.7结果 在2.1色谱条件下，样品HPLC图见附图。结果表明：在10.33-165.28μg／ml浓度范围内呈良好线性关系，其相关系数r=0.9998。西蒙叶中咖啡酸含量见表１。其回收率为99.38±1.36%。 |
| 表１ 西蒙叶中咖啡酸的含量 (n =5)
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| 年度 |
咖啡酸的含量(%) |
RSD（%） |
| 97 |
0.0292 |
3.27 |
| 98 |
0.0473 |
3.88 |
| 99 |
0.0316 |
1.59 | |
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表２ 咖啡酸的回收率
| 序号 |
取样量( g) |
相当量C.A量(mg) |
加入量 (mg) |
实际测得量 (mg) |
回收率 (%) |
Χ±RSD(%) |
| 1 |
10.0034 |
2.7209 |
3.010 |
5.6460 |
97.18 |
99.38±1.36 |
| 2 |
10.0016 |
2.7204 |
3.010 |
5.6945 |
98.81 |
| 3 |
10.0001 |
2.7200 |
3.010 |
5.7151 |
99.50 |
| 4 |
10.0021 |
2.9880 |
1.000 |
4.0003 |
101.23 |
| 5 |
10.0022 |
2.9880 |
1.000 |
3.9890 |
100.10 |
| 6 |
10.0019 |
2.9880 |
1.000 |
3.9828 |
99.48 | |
表３ 咖啡酸精密度测定
| 序号 |
进样量(μl) |
A |
RSD(%) |
| 1 |
5 |
22063 |
0.98 |
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| 2 |
5 |
22464 |
| 3 |
5 |
22247 |
| 4 |
5 |
21887 |
| 5 |
5 |
22160
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3.1
经测定西蒙叶中咖啡酸含量分析发现，不同年份的西蒙叶中咖啡酸含量变化幅度较大，但含量与贮藏时间未呈现负相关；98年西蒙叶中咖啡酸的含量明显高于97、99年，这可能与当年的气温、降水及采收时间等因素有关。
3.2
有关咖啡酸的测定方法国内未见有文献报导，根据咖啡酸结构类似于阿魏酸[3]，作者通过实验摸索，建立了HPLC法测西蒙叶中咖啡酸的含量，方法简便，专属性强，灵敏度高，重现性好，适用于药材中咖啡酸的含量测定。
3.3
在用HPLC法测西蒙叶中咖啡酸的含量时，曾采用多种不同配比的流动相，通过试验证明MeOH:1%HAc(35:65)为最佳配比，达到分离效果，峰形较好。
3.4
考虑到中药材中所含成分较多，在醇提过程中，曾采用多种方法进行提取：①药材用甲醇回流提取２小时，过滤，回收乙醇，残留物用热蒸馏水溶解，醋酸乙酯多次萃取，回收醋酸乙酯，残留物甲醇溶解定容；②甲醇超声提取；③甲醇回流提取。经实验发现，方法①不仅过程繁琐费时，且目标成分咖啡酸损失严重，所测98年西蒙叶中咖啡酸的含量仅为
0.0018%（实际含量0.0473%）；方法②所得提取液中，所测97年西蒙叶中咖啡酸的含量仅为0.0074%，咖啡酸的测得值较实际含量（0.0292%）明显要低；方法③操作简便，咖啡酸的提取较完全，损耗小，为一从样品中提取咖啡酸的有效方法。 参考文献
1.黎盛蓉、唐果成、齐振华等.西蒙1号治疗血小板减少症50例近期疗效观察.
临床血液学杂志，1992，5（1）：8 2.钱康年、徐平声、梁晓明. 药用白甘薯叶片药理作用的初步研究
中药与临床，1990，（1）：2。
3.陈汉平等. 高效液相色谱法测定当归及其炮制品中阿魏酸的含量.中草药，1998，19（10）：15。
4.谭桂山、徐平声、戴志勇，唐果成. 引种巴西甘薯化学成分研究（Ⅰ）.天然产物研究与开发，1995，4（7）。
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