HPLC法测定拮新康胶囊中甲基莲心碱含量色谱分析实例 | 39康复网

（中南大学湘雅医院药剂科）

　　　摘要目的：建立拮新康胶囊中甲基莲心碱HPLC测定法，以控制该制剂的质量。方法：样品用2%HAc-甲醇提取。采用Hypersil-ODS C18柱，以甲醇-水-三乙胺（70：30：0.05）为流动相，检测波长：282nm。结果：甲基莲心碱线性范围11-220μg/ml；平均加样回收率为98.97%。RSD为2.99%（n=6）。结论：本法简便，快速，适用于该产品质量控制。关键词拮新康胶囊甲基莲心碱 HPLC

　　　拮新康胶囊系由莲子心、黄芪等中药材经提取加工制成的胶囊剂，具有清热解毒，益气养血，逆转耐药，抗肿瘤的功能。临床用于治疗白血病及其它气血两虚，热毒瘀结型恶性肿瘤。药理实验研究表明[1][2][3][4]，甲基莲心碱是拮新康胶囊中的主要有效成分。有文献报道用HPLC法测莲子心中 3种生物碱的含量[5]，用薄层扫描法测定莲子心中甲基莲心碱及莲心碱的含量[6]，本实验采用HPLC对拮新康胶囊中的甲基莲心碱含量测定方法进行了实验研究，结果表明，该法操作简便，快速，可用于拮新康胶囊的质量控制。 1 仪器与试剂 HP1100液相色谱仪（美国惠普公司），紫外检测器（美国惠普公司），KQ-500型超声波清洗器（昆山市淀山湖检测仪器厂），甲基莲心碱对照品（湘雅医院药剂科，纯度>99%），拮新康胶囊（湘雅医院药剂科生产），其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件色谱柱：Hypersil-ODS C18 柱，（4.6mmΧ 250mm， 5μm），流动相：甲醇-水- 三乙胺（70:30:0.05），柱温：室温，流速： 0.7ml/min，检测波长 282nm，进样量： 5μl。UV、HPLC对照品、样品图见附图。 2.2 对照品溶液制备精确称取甲基莲心碱对照品55.0mg，置100ml量瓶中，加2%HAc-甲醇适量使之溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。（每1ml含甲基莲心碱550 μg）。 2.3 标准曲线的制备精密吸取甲基莲心碱对照品溶液0.2，0.4，1.0，2.0，4.0ml置10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，分别进样 5μl，以峰面积与对应浓度绘制标准曲线,得回归方程： A=493C+66，r=0.9999。甲基莲心碱在11-220μg/ml浓度范围内呈良好的线性关

　　系。 2.4 样品溶液的制备取胶囊内容物适量，碾成细粉，精密称取约1g,置带塞的磨口三角瓶中，加2%HAc-甲醇液50.00ml，超声提取30分钟后，静置1小时，再超声30分钟，静置，过滤，弃去初滤液，取续滤液 5ml置量瓶中作为样品溶液。 2.5 测定吸取样品溶液及对照品溶液5μl ，注入液相色谱仪，用外标法进行测定，按此含量测定方法，测定4批样品，结果见表1。 2.6 精密度实验同一样品，相同进样量，重复进样6次，甲基莲心碱峰面积积分值的RSD为0.83%，结果见表2。 2.7 回收实验取已知含量样品6份，各加入一量的甲基莲心碱对照品，同前法制成样品溶液，并测定其甲基莲心碱含量，每次进样5μl，计算加样回收率，结果见表3。

　　表1 拮新康胶囊中甲基莲心碱含量（n=4）

批号	甲基莲心碱含量（%）	RSD（%）
19 991101	0.337	2.83
20000115	0.338	1.59
20000116	0.295	3.63
20000117	0.273	4.87

表2 精密度实验结果

序号	进样量（μl）	A	RSD（%）
1	5	105593	0.83
2	5	105092
3	5	105005
4	5	103713
5	5	104312
6	5	103355

表3 甲基莲心碱的回收率（样品含量：0.337%）

序号	取样相当量(mg)	加入量(mg)	测得量(mg)	回收率(%)	X ±RSD(%)
1	4.588	4.710	9.173	97.35
2	4.789	4.710	9.330	96.40
3	5.381	4.710	9.911	96.17	98.97 ± 2.99
4	3.274	0.942	4.251	103.67
5	3.240	0.942	4.174	99.11
6	3.330	0.942	4.282	101.10

　　　3 讨论
　　 3.1　本文建立了拮新康胶囊中甲基莲心碱的HPLC测定方法，从色谱图上可看出甲基莲心碱能达到分离，方法简便。　　　 3.2 　莲子心中有多种双苄异喹啉生物碱（甲基莲心碱，异莲心碱，莲心碱）结构相　近，理化性质相似，曾用不同配比的流动相不能达到分离的目的。多次改动之后以甲醇－水－三乙胺（70:30:0.05）为最佳配比，达到分离效果。　3.3　文献报道[7.]，甲基莲心碱在PH值为3时，其稳定性最好。作者通过实验证明，若采用单纯甲醇提取，甲基莲心碱易分解，目标峰处出现双峰。在提取液中加 2%HAc 得到的目标成分稳定性好，与文献相符。 3.4 提取样品时，作者对提取溶剂，方式及时间进行了比较，结果以甲醇超声提取二次最好，见下表。

提取方法	2%HAc-甲醇超声一次	2%HAc-甲醇超声二次	2%HAc-乙醇超声一次	2%HAc-乙醇超声二次	2%HAc-甲醇温浸一次	2%HAc-甲醇温浸二次
甲基莲心碱含量（%）	0.39	0.45	0.11	0.08	0.35	0.39

　　参考文献
　　 1.胡文淑等. 中国药理学与毒理学杂志，1989，3（1）：43
　　 2.李贵荣等. 中草药，1988，19（5）：25
　　 3.李贵荣等. 中国药理学报，1988，9（2）：139
　　 4.郭毛娣等. 中草药，1984，（7）：3
　　 5.张先洲等. 高效液相色谱法测定莲子心中3种生物碱的含量. 药物分析杂志，1997，17 （2）：110
　　 6.徐平声等. 薄层扫描法测定莲子心中甲基莲心碱及莲心碱的含量. 中国药学杂志，近期发表
　　 7.张先洲等. 中成药，1994，16（2）：1

作者： 2007-5-18