色谱法测定磷酸苯丙哌林口服液的含量

          磷酸苯丙哌林口服液(科特口服液)为非麻醉性镇咳药，其含量测定方法有提取-紫外分光光度法［1］，操作较繁琐，费时，结果误差较大。也有采用阴离子表面活性剂滴定法测定［2］。本文采用了高效液相色谱法测定其含量，分离效果好，操作简便，结果准确可靠。
            1　仪器与试药
            　　高效液相色谱仪(岛津LC-10A vp)，二极管阵列检测器(SPD-M10A vp)。
            磷酸苯丙哌林对照品(批号：0237-9701，中国药品生物制品检定所)，磷酸苯丙哌林口服液(规格为100 mL∶200  mg)、辅料(蔗糖、蜂蜜、山梨酸钾、β-环糊精、柠檬香精、薄荷油、乙醇)均由深圳市长白山制药实业有限公司提供，符合药用标准。甲醇为色谱纯，冰醋酸、三乙胺均为分析纯。

            2　色谱条件
            色谱柱：Shim-pack CLC-ODS(M)4.6 mm×150 mm，岛津公司；流动相：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺醋酸溶液(取三乙胺液14 mL，冰醋酸5.7 mL，加水稀释至100  mL)(60∶40∶5∶0.5)；流速：1 mL.min-1；检测波长：270 nm；进样量：10  μL；磷酸苯丙哌林与辅料的分离度为6.5。

            3　线性关系
            精密称取于105 ℃干燥至恒重的磷酸苯丙哌林对照品50.9　mg，置50 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，即得对照品贮备溶液。精密吸取1、2、3、4、5 mL分别置于25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件，分别进样10 μL，以主峰面积为横坐标(X)，对照品浓度(μg.mL-1)为纵坐标(Y)作图，回归方程为：
            Y=3.609×10-4X+2.674　r=0.9999
            线性范围40.7～203.6　μg.mL-1。

            4　加样回收试验
            精密吸取已测知含量的口服液5 mL，分别加入对照品5、10、20 mg于100  mL量瓶中，照“样品测定”项下方法测定，测得平均回收率分别为100.4%、99.75%、99.83%，RSD分别为0.8%、0.8%、0.6%，n=5。

            5　空白试验
            取按处方配制的辅料空白液，按回收试验项下的方法操作，结果在对照品的出峰时间无色谱峰出现，说明辅料对主药测定无干扰，结果见图1-A。

            6　重现性试验
            按样品的测定方法测定同一批样品，结果含量平均值为96.56%(n＝5)，RSD=0.4%，说明方法的重现性较好。

            7　稳定性试验
            将供试品溶液分别在0、24 h进样测定，测得结果一致，说明样品稳定性较好。

            8　样品测定
            精密吸取本品5 mL(约相当磷酸苯丙哌林10 mg)，置100 mL量瓶中，加入流动相溶解并稀释至刻度，过滤(0.45 μm)，即得样品溶液。精密吸取“2.2”项下对照品贮备溶液10 mL于100 mL量瓶中，加入流动相稀释至刻度即为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液与样品溶液各10 μL进样，用外标法进行测定

            9　讨论
            9.1　流动相的选择　磷酸苯丙哌林为弱碱性物质，在反相色谱系统中产生色谱峰拖尾现象，故在流动相中加入三乙胺作为扫尾剂［3］，消除拖尾现象，同时为了获得较适宜的保留时间，在流动相中加入冰醋酸使呈酸性，以缩短保留时间。

            9.2　方法的选择　采用本法测定磷酸苯丙哌林口服液的含量，不需分离提取，直接测定，结果准确，精密度好。标准法［1］需多次提取，操作繁琐，不易提取完全而导致测定结果偏低(见表1)。改进法［2］虽准确性提高了，但仍操作不便，因此本法不失为较可取的检测方法之一。笔者也曾尝试采用导数光谱法测定其含量，但试验中发现其辅料溶液在270 nm波长处有1个强于主药约4倍的吸收峰，无法用导数消除。