色谱法测定高三尖杉酯碱注射液含量

    摘要　目的：采用高效液相色谱法测定高三尖杉酯碱注射液含量。方法：以Alltima C18柱为分析柱，流动相为0.01 mol.L-1磷酸二氢钾(磷酸调pH 2.5)-甲醇(60∶40),检测波长为288 nm，峰面积外标法。结果：平均回收率为100.6 %(n=6),RSD=0.66 %。结论：本法简便、快速，结果准确、可靠。

            　　关键词　高效液相色谱法　高三尖杉酯碱
            三尖杉属植物是我国特产［1］，高三尖杉酯碱（以下简称HHT）是其中分离出来的一种治疗急性非淋巴细胞白血病的有效药物，中国药典(1995年版)［2］对其原料及注射液采用紫外分光光度法测定含量，该法专属性不强，当样品放置时间较长而产生降解时，因无法分离其降解产物而使含量偏高。本文建立的高效液相色谱法能有效地分离降解产物，从而准确地测得HHT的实际含量，方法简单、快速，结果令人满意。
            1　仪器与试药
            Waters高效液相色谱仪，486检测器，800色谱工作站。
            甲醇为HPLC级，磷酸二氢钾、磷酸为分析纯。HHT对照品及其注射液由杭州民生药厂提供，对照品含量为100.4%（药典方法测得）。

            2　色谱条件
            色谱柱：Alltech 公司生产Alltima C18柱，4.6 mm×150 mm 10 μm；流动相：0.01mol.L-1磷酸二氢钾(磷酸调pH 2.5)-甲醇(60∶40)；流速：1.0  mL.min-1；检测波长：288 nm。

            3　线性范围
            精密称取HHT对照品25 mg,置于25 mL量瓶中，加流动相溶解并定容得1mg.mL-1的对照品贮备液。精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、5.0mL分别置于10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，进样50μL，结果峰面积Y与浓度X(μg.mL-1)的关系为：
            Y=37963.7+21004.3X　r=0.9999
            线性范围为50～500 μg.mL-1。

            4　精密度试验
            精密量取对照品贮备液2 mL，加流动相稀释至10 mL，重复进样6次，结果RSD为0.43 %。

            5　加样回收率试验
            精密量取已知含量的HHT注射液1 mL，置于10 mL量瓶中，加入HHT对照品贮备液1.0 mL,加流动相稀释至刻度，进样50  μL，计算加样回收率的平均值为100.6 %(n=6),RSD=0.66 %。

            6　空白试验
            不加辅料、主药，按回收率试验操作，结果无杂峰出现。

            7　样品的测定
            精密量取本品2 mL，置于10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，进样50 μL，以外标法计算，结果与药典法(UV法)测定结果比较，见表1和图1。

            8　讨论
            通过实验发现，当磷酸二氢钾浓度分别为0.1、0.05、0.02、0.01 mol.L-1时与甲醇以不同比例混匀，均能使HHT注射液中的主药与降解产物分离，为保护柱子，本文选择0.01 mol.L-1浓度，在该浓度下，分别用磷酸调pH

            2.5、3.0及不调的盐溶液（pH约为4.4）与甲醇以不同比例混合为流动相时，发现以pH 2.5的盐溶液的峰形较好，故选择0.01 mol.L-1磷酸二氢钾(磷酸调pH 2.5)- 甲醇(60∶40)为流动相。

            图1　HHT注射液的HPLC图
            1～3.杂质　4.高三尖杉酯碱
            从图1和表1可知，随着样品贮藏期延长，降解产物增多，用本法能分离到3个降解产物，正确测得的HHT实际含量比采用药典的紫外分光光度法要低。