点击显示 收起
摘要：目的：采用高效液相色谱法测定盐酸罗格列酮的含量及有关物质。方法：色谱柱为岛津公司Shim—pack C18柱(250mmx4.6mm，5μm)，以乙腈-0.01mol/L醋酸铵缓冲液(40：60，用醋酸调节pH=6.0)为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长为244nm。结果：盐酸罗格列酮在40～160μg/mL范围内呈良好的线性关系，r=0.9999；最低检出限0.04ng；日内精密度(RSD<0.5％)与日间精密度(RSD<1.0％)良好。结论：本方法简便、快速，结果准确、可靠。
关键词：盐酸罗格列酮；含量测定；有关物质；反相高效液相色谱法
盐酸罗格列酮(rosiglitazone)为噻唑烷二酮类衍生物，是一种选择性过氧化酶增殖激活γ受体激动剂。通过提高胰岛素的敏感性，促进周围组织对葡萄糖的利用，用于治疗I型糖尿病。本文采用高效液相色谱法测定盐酸罗格列酮的含量及有关物质，试验结果表明，该方法操作简便，结果准确可靠。
1 仪器与试药
岛津LC-lOATvp高效液相色谱仪，SPD-MIOA二极管阵列检测器；Agilent 1100高效液相色谱仪。
盐酸罗格列酮精制品(含量为100.0％，HPLC归一化法标化)，原料药及中间体I(吡啶氨醇)、Ⅱ(醚醛)、Ⅲ(烯)均由浙江海正药业股份有限公司提供，乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。
2 色谱条件
色谱柱：岛津公司Shim—pack Cl8柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：乙腈-0.01mol/L醋酸铵溶液(40：60，用醋酸调节pH=6.0)，流速：1.0mL/min，检测波长为244nm，进样量为10μL，按盐酸罗格列酮峰计算理论板数大于2000。
3 专属性
3．1 原料与中间体的分离效能根据生产工艺，盐酸罗格列酮可能引入的杂质主要是中间体I(吡啶氨醇)，Ⅱ(醚醛)，Ⅲ(烯)。取盐酸罗格列酮和3个中间体适量，加流动相配制成混合供试品溶液后进样10μL，记录色谱图，结果表明在该色谱条件下盐酸罗格列酮与3个中间体能完全分离。
3．2 降解产物的检出取本品3份(各约20mg)，分别置于100mL量瓶中，分别加1mol/L的氢氧化钠溶液、1 mol/L 的盐酸溶液和30％ 过氧化氢溶液各10mL。放置24h，分别用酸、碱中和，加流动相稀释至刻度，滤过，作为上述破坏的供试品溶液，另取本品适量，加流动相稀释制成约含盐酸罗格列酮0.2mg/mL 的溶液，经4500lx光照24 h后，作为光破坏供试品溶液，取上述4种溶液各10μL进样，记录色谱图和三维色谱图。结果在碱和氧化破坏条件下，样品极不稳定，产生的降解杂质均能与主峰很好分离。样品对酸和光较稳定。
3．3 最低检出量该系统在浓度为2ng/mL，进样10μL情况下仍能3倍于噪声检出，最低检测量为0.04ng。
4 线性关系
精密称取精制品约相当于含罗格列酮80mg，加甲醇溶解并稀释至100mL的量瓶中，作为精制品储备液。取精制品储备液5.0，7.0，9.0，10.0，11.0，15.0，17.0，20.0mL分别置100mL的量瓶中，同法定容。按上述色谱条件，分别进样10μL进行测定，记录色谱峰，在40—160μg/mL范围内盐酸罗格列酮的峰面积(A)与精制品浓度(C)呈良好的线性关系，回归方程为：A =40.662C+28.921，r=0.9999。
5 精密度试验
取本品(批号001201)，照含量测定项下的方法于同一日内和不同日问(5日内，每日测定1次)分别测定含量5次，计算日内和日问精密度，结果日内平均含量为99.7％，RSD为0.4％；日问平均含量为99.5％，RSD为0.6％。
6 溶液的稳定性和进样重现性
取含量测定用供试品溶液，分别在0，1，3，5，10h进样，结果峰面积的RSD为0.43％，表明供试品溶液稳定且进样重现性好。
7 含量测定
精密称取盐酸罗格列酮精制品和原料药各适量，分别加甲醇制成每1mL约含罗格列酮80μg的溶液，按上述色谱条件测定，以外标法按峰面积计算含量。
8 有关物质测定
取盐酸罗格列酮适量，精密称定，加流动相制成每1mL中约含罗格列酮200μg的溶液，同时配制每1mL中约含2.0μg 的溶液作为自身对照溶液(1.0％)，按上述色谱条件测定，记录色谱图至主峰保留时间的3倍。以外标峰面积不加校正因子主成分自身对照法测定有关物质。
9 讨论
9．1 中间体和降解产物对分离效能的影响 盐酸罗格列酮合成过程中可能会带进原料、中间体等杂质。专属性试验表明，本色谱条件能有效分离原料、中间体及降解产物。
9．2 流动相与pH对分离效能的影响 以离主峰最近的中间体Ⅲ为分离标志，以乙腈与0.01mol/L醋酸铵溶液不同的比列与不同的pH为流动相，结果当pH为6.0，比列为40：60时，样品与各中间体均获得较好分离。
9．3 波长的选择测定结果显示，样品中存在的主要杂质为中间体Ⅲ(占测得杂质的85％以上)，因此选择盐酸罗格列酮与各中间体(尤其中间体Ⅲ)有相同的响应值的波长为测定波长。中间体I、Ⅱ、Ⅲ与样品在此波长处的校正因子分别为0.73，0.91与1.01。
参考文献
1 AN Fu—rong(安富荣)，SHIAn—guo(施安国)．Insulin boost up by rosiglitazone male_ate(胰岛素增敏剂罗格列酮马来酸盐)．World Notes Parrn Med(国外医学药学分册)，1999，26(4)：213