高效液相色谱法测定盐酸纳洛酮片含量及含量均匀度

目的：报道反相高效液相色谱法测定盐酸纳洛酮片的含量及含量均匀度。方法：采用C₁₈柱，以乙酰苯胺为内标，甲醇-乙腈-0.02 mol^.L^-1磷酸二氢钾溶液(1.5∶1.0∶7.5)为流动相，检测波长240 nm。结果：在进样量0.4～4 μg，内标物为0.2 μg时，其峰面积比值呈良好线性，r=0.999 9(n=6)。方法平均回收率100.1%，RSD为0.56%(n=9)。结论：方法简便、准确、专属。
关键词　盐酸纳洛酮片　高效液相色谱法

盐酸纳洛酮(naloxone hydrochloride)化学名为17-烯丙基-4，5α环氧基-3，14-二羟基吗啡喃-6-酮盐酸盐，该药为阿片受体拮抗剂，可用于治疗麻醉镇痛药过量中毒、酒精中毒等^［1～3］。盐酸纳洛酮含量测定有气相色谱法^［4］、液相色谱法^［5，6］。其片剂的含量测定未见文献报道，本文建立了反相高效液相色谱法测定盐酸纳洛酮片剂的含量，该法以甲醇-乙腈-0.02 mol^.L^-1磷酸二氢钾溶液为流动相，以乙酰苯胺为内标，C₁₈柱分离，方法操作简便，重现性良好，可用于该药的含量及含量均匀度测定。
1　材料与方法
1.1　仪器与试药　日本日立655型高效液相色谱仪；日立683紫外检测器；日立655-60微处理机；日本岛津UV-160A紫外分光光度计；盐酸纳洛酮原料药(纯度为99.8%)及片剂(本所研制，北京四环制药厂生产)；14-羟基-7，8-二氢吗啡酮(本所合成)；乙酰苯胺(Fluka公司出品，GR)；甲醇、乙腈为色谱纯；其它试剂均为分析纯；水为重蒸馏水。
1.2　色谱条件　色谱柱：YWG-C₁₈柱，10 μm，4.6 mm×150 mm；流动相：甲醇-乙腈-0.02 mol^.L^-1磷酸二氢钾溶液(1.5∶1.0∶7.5)；流速：1.0 mL^.min^-1；纸速：2.5 mm^.min^-1；检测波长：240 nm；进样量：20 μL。
1.3　内标溶液的配制　取乙酰苯胺5 mg，精密称定，置于500 mL量瓶中，加甲醇-0.05 mol^.L^-1盐酸溶液(7∶3)溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
1.4　校正因子及样品的测定
1.4.1　校正因子的测定　取盐酸纳洛酮对照品约8 mg,精密称定，置于100 mL量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，色谱进样20 μL，计算校正因子。
1.4.2　供试品溶液的制备与测定　取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸纳洛酮0.4 mg)，置具塞试管中，精密加内标溶液5 mL，超声振荡10 min，使主药溶解，用＜1 μm微孔滤膜滤过，取续滤液为供试品溶液，取20 μL注入液相色谱仪，测定，计算即得。

2　结果与讨论
2.1　标准曲线及最低检出量　精密称取盐酸纳洛酮对照品20 mg，置于25 mL量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，从中精密吸取0.25，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，分别置于10 mL量瓶中，再加内标溶液至刻度，摇匀，分别取20 μL注入液相色谱仪，计算盐酸纳洛酮峰面积与内标峰面积之比，并与对照品浓度作图，盐酸纳洛酮进样量在0.4～4 μg，内标物在0.2 μg时，与峰面积比值呈良好线性。经统计处理得回归方程(n=6)：
Y=0.034 7+0.397 6X　r=0.999 9
信噪比为3∶1时，盐酸纳洛酮的最低检测量为0.04 μg。
2.2　重现性试验　按实验方法配制1批盐酸纳洛酮片的供试品溶液5份，依法测定，结果证明重现良好，RSD为0.63%。
2.3　精密度试验　取盐酸纳洛酮标准曲线高、中、低3种浓度，按含量测定方法测定，分别进样5次，结果证明方法精密度良好，RSD分别为0.69%，0.57%，0.64%。
2.4　回收率试验　依法配制盐酸纳洛酮高、中、低3种浓度的对照品溶液各3份，各按每片的处方量加入辅料，超声振荡10 min，以下依法测定，结果表明该药回收率完全，辅料对测定无干扰，盐酸纳洛酮平均回收率分别为99.80%，100.1%，100.6%，RSD分别为0.62%，0.50%，0.56%(n=9)。
2.5　杂质检查　取本品2片，加内标溶液4 mL，超声振荡10 min，使主药溶解，滤过，取20 μL色谱进样。本文对5批盐酸纳洛酮片依法检查其杂质，结果表明杂质含量均小于1%。盐酸纳洛酮、杂质14-羟基-7，8-二氢吗啡酮、内标3者分离良好，见图1。
2.6　含量均匀度测定结果　随机取3批盐酸纳洛酮片，每批10片，每片分别置10 mL量瓶中，以下按含量测定方法测定，结果符合中国药典1995年版附录ⅩE含量均匀度项下有关规定，见表1。

图1　色谱图
A.对照品　B.杂质　C.供试品
1.溶剂　2.14-羟基-7，8-二氢吗啡酮(杂质)
3.盐酸纳洛酮　4.乙酰苯胺(内标)

表1　盐酸纳洛酮片含量均匀度测定结果(n=10)

2.7　样品测定　应用此法测定了3批盐酸纳洛酮片原始含量及室温贮存3年含量，结果均符合标示量，见表2。

表2　盐酸纳洛酮片含量测定结果(n=3)

高立军（军事医学科学院毒物药物研究所　北京　100850）
王维贤（军事医学科学院毒物药物研究所　北京　100850）