高效液相色谱法测定制霉灭滴胶囊中盐酸小檗碱的含量

目的：为控制制霉灭滴胶囊中盐酸小檗碱的含量，建立了反相高效液相色谱测定法。方法：色谱柱为TSKgel-ODS-80TS(250 mm×4.6 mm)，流动相：甲醇-乙腈-0.05 mol^.L^-1磷酸二氢钠(20∶30∶55)，流速：0.5 mL^.min^-1，检测波长为346 nm。结果：盐酸小檗碱在18～150 ng范围内呈良好的线性关系，r=0.999 9，回收率为99.0%。结论：本文建立的高效液相色谱法为测定制霉灭滴胶囊中盐酸小檗碱的含量提供了可靠的分析方法。
关键词　制霉灭滴胶囊　高效液相色谱法　盐酸小檗碱

制霉灭滴胶囊是由蒲公英、白鲜皮、黄柏等13味中药加工而成的纯中药复方制剂。用于治疗霉菌性阴道炎、滴虫性阴道炎。文献报道测定盐酸小檗碱含量的方法很多，本文采用的HPLC法阴性对照对测定无影响，方法灵敏、快速。

1　仪器

　　岛津LC-6A高效液相色谱仪；SPD-6A检测器；美国HP-3394积分仪；固定相：C₁₈硅胶(5　μm)，色谱柱：日本TSKgel-80TS(250 mm×4.6 mm)。

2　试药

　　盐酸小檗碱对照品购自中国药品生物制品检定所；甲醇：优级纯；无水乙醇：分析纯；制霉灭滴胶囊及阴性对照由广东永康药业股份公司提供；关黄柏(Phellodendron amurense Rupr.)购自广州市药材公司。

3　色谱条件

　　流动相：甲醇-乙腈-0.05 mol^。L^-1磷酸二氢钠(20∶30∶55)；检测波长：346 nm。流速：0.5 mL^。min^-1；AUFS：0.04。

4　实验方法与结果

4.1　对照品储备液的制备　精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加流动相溶解，配制成0.124 mg^。mL^-1储备液。
4.2　可行性试验　精密量取上述对照品储备液适量，用流动相稀释制成74.4 μg^。mL^-1的溶液，摇匀，进样10 μL；称取制霉灭滴胶囊内容物及阴性对照样品适量，按样品测定方法提取，进样，色谱图见图1。由图可知盐酸小檗碱的保留时间约为16 min，制霉灭滴胶囊中其它成分对测定盐酸小檗碱没有影响。

图1　制霉灭滴胶囊中盐酸小檗碱的HPLC色谱图
A.巴马汀　B.盐酸小檗碱
C.制霉灭滴胶囊黄柏阴性对照　D.制霉灭滴胶囊
1.巴马汀　2.盐酸小檗碱

4.3　线性关系考察　精密量取对照品储备液0.15，0.3，0.6，0.9，1.2 mL于10 mL量瓶中，分别用流动相稀释至刻度，摇匀，分别进样10 μL，以峰面积对对照品溶液浓度进行线性回归，得到回归方程和相关系数分别为：
Y=16 763X-12 010　r=0.999 9
盐酸小檗碱的线性范围为18～150 ng。
4.4　精密度测定　精密量取同一对照品储备液0.6 mL于10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，进样10 μL，测定，其峰面积的RSD为1.6%(n=6)。
4.5　回收率测定　精密称取制霉灭滴胶囊内容物1 g共5份，分别加入盐酸小檗碱对照品储备液2 mL，各份依照样品含量测定项下方法操作，计算回收率，5次测定结果平均值为99.0%(RSD=2.7%)。
4.6　样品测定　精密称取制霉灭滴胶囊内容物2 g(平均每粒胶囊内容物为450 mg)于圆底烧瓶中，精密加入无水乙醇50 mL，称重，于90 ℃回流提取3 h，放置室温，加无水乙醇补至回流前的重量，摇匀，过滤，收集滤液，残渣用无水乙醇洗涤3次，与滤液合并后减压蒸干，残渣用流动相溶解并定容至10 mL，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)过滤，进样10 μL，记录色谱峰面积，用外标法计算含量。测定3批样品，结果见表1。

表1　3批制霉灭滴胶囊中盐酸小檗碱每粒含量
测定结果(n=3)

5　讨论

　　流动相中不含乙腈时，达不到基线分离。试验结果表明，当乙腈为30%时，盐酸小檗碱能与其它成分分开。
　　提取后的样品残渣用流动相溶解，基线较好，并且没有拖尾峰。
　　经过提取方法、提取溶剂、提取时间及样品与溶剂的比例等条件的比较，用优化的条件进行了加样回收率测定，说明在本文提取条件下，被测定成分能够提取完全。

李宝明（中国医学科学院　中国协和医科大学药物研究所　北京　100050）
何丽一（中国医学科学院　中国协和医科大学药物研究所　北京　100050）