高效液相色谱法测定栀子I号方中栀子苷的含量

关键词：高效液相色谱法；栀子苷；栀子I号方
　　栀子I号方(临床验方)是由栀子、芦荟等中药组成的复方制剂。栀子是君药，具有抗炎解热镇痛作用。其中栀子苷是其主要有效成分，根据文献报道近年栀子苷含量测定的方法主要有薄层扫描法和高效液相法。本文采用高效液相色谱法准确快捷地测定了制剂中栀子苷的含量，为控制本方的内在质量提供了科学依据。
1 仪器与试药
仪器：Water600E高效液相色谱仪；Water486双波长紫外检测器；Zorhax Cl8(4.6mm×250mm)色谱分析柱；KQ-250超声波处理器。
试药：乙腈为色谱纯；水为双蒸水；其他试剂均为分析纯。栀子苷对照品(含量测定用，购于中国药品生物制品检定所，批号为749-20O1O8)；
栀子I号方制剂是栀子I号方药材经过粉碎，加水煎煮提取3次后，滤过，用含醇量达75％的乙醇沉12小时，再过滤获得的提取液。提取液再经过减压浓缩，真空干燥而成的干浸膏粉末。
2 实验方法及结果
2．1色谱条件 色谱柱Zorbax Cl8(4.6mm×250mm)，流动相：乙腈-水(15：85)，柱温25℃，流速1.0mL／min，检测波长238nm，进样量20μL。
2．2 供试品溶液制备 精密称定栀子I号方干浸膏粉0.34g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇50mL，密闭，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再次称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液4mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
2．3 对照品溶液制备 精密称定干燥至恒重的栀子苷对照品6.00mg，加甲醇溶解并定容至50mL容量瓶中，即得。
2．4 空白对照制备 取自制不含栀子的空白制剂样品，按供试品溶液的制备方法制备缺栀子的阴性对照溶液，即得。
2．5 线性关系考察 吸取对照品溶液适量，分别用甲醇稀释成浓度为120、60、30、15、7.5μg／mL，精密吸取上述各浓度溶液20μL，分别注入高效液相色谱仪，以对照品溶液的浓度(μg／mL)为横坐标，以对照品峰面积为纵坐标作图，绘制工作曲线。回归方程为：Y=341.07X一446.99，r=0.9998，结果表明栀子苷进样量在0.15～2.4μg间呈良好的线性关系。
2．6 精密度试验 精密吸取30μg／mL的对照品溶液20μL，连续5次进样，结果相对偏差RSD=1.23％。
2．7 稳定性试验 精密吸取30μg／mL的对照品溶液20μL，分别于0、1、2、4、6、8小时内依法测定栀子苷的峰面积积分值，结果RSD=1.23％，表明栀子苷在8小时内稳定。
2．8 回收率试验 精密称定已知栀子苷含量的栀子I号方干浸膏粉(含量为1.39％)0.34g，平行操作5份，分别精密加入栀子苷对照品溶液1mL(对照品溶液浓度配成4.69 mg／mL)，按供试品溶液制备项下的方法制备样品溶液，注入高效液相色谱仪中测定，计算得回收率为101.0％，RSD=1.56％。
2．9 重现性试验 取同一批样品6份，分别按供试品制备项下的方法制备样品溶液，注入高效液相色谱仪中测定栀子苷的含量，结果为13.513、13.396、13.687、13.876、13.934、13.735mg／g。RSD为1.51％，表明重现性良好。
2．10 样品测定 分别取对照品各浓度溶液20μL，供试品溶液20μL，进行测定。依法测定3批栀子I号方中栀子苷的含量。
3 讨论
(1)在上述色谱条件下可见主色谱峰与相邻其他色谱峰的分离度均大于1.5，理论塔板数不低于1500，说明色谱条件下分离栀子I号方中栀子苷的效果好。
(2)空白试验表明，取各味药材(缺栀子)，按栀子I号方工艺制备空白样品，并按上述方法操作，在栀子苷峰相应的保留时间处，无相应的峰出现，表明本方法测定中其它药材不干扰栀子苷的测定。
(3)栀子I号方含有大量苷类成分包括皂苷、蒽醌苷及甾体苷等，化学性质比较接近，采用甲醇超声提取，高效液相色谱法测定可很好地将栀子苷和其他苷类成分分开，并能准确定量。
(4)通过精密度、稳定性和回收率试验以及标准曲线的建立试验及对复方的含量测定，表明该方法灵敏可靠、重现性好，可用于栀子I号方的质量控制。
参考文献
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[2]文字真，薄层扫描法测定克清片中栀子苷含量[J]．中药材，2003，26(7)：521