反相高效液相色谱法测定养肝澳平合剂中芍药苷的含量

                    反相高效液相色谱法测定养肝澳平合剂中芍药苷的含量
                       作者：万伟中，田立元         来源：时珍国医国药
    摘要：目的：测定养肝澳平合剂中芍药苷的含量，以控制制剂质量。方法：反相高效液相色谱法(RP-HPLC)。十八烷基键合硅胶为固定相，以乙腈：水(15：85)为流动相，检测波长为243nm。结果：方法准确可靠。重现性好。结论，可用于制剂质量控制。
    关键词：养肝澳平合剂；反相高效液相色谱法；芍药苷
    养肝澳平合剂是我院验方，临床使用1O余年，效果显著。其主要由当归、丹皮、赤芍、茵陈、丹参、郁金、砂仁等13味中药精制而成。具有养血、活血、凉血理气、清热解毒等作用，主治肝炎。经预试及第1阶段临床总结ALT复常率71.1%，GGT复常率58.1%，HBeAg转阴率8O%。丹皮、赤芍为其中君药，而芍药苷为丹皮、赤芍的主要有效成分。故选择芍药苷为控制本品质量的指标成分，采用反相高效液相色谱法测定养肝澳平合剂中芍药苷的含量。
    1 仪器与试药
    1．1 仪器Waters高效液相色谱仪；Resolve ODS-Cl8柱；486可调紫外检测仪；U6K进样器；H66025T型超声清洗机；十万分之一电光天平(德国sartorius)；微孔滤膜(O.45μm)。
    1．2 试药养肝澳平合剂(本院制剂室提供，批号为020821、030228，031021．040312)，芍药苷对照品，分装号为736-9417购于中国药品生物制品检定所，所用药材均购于南京市药业股份公司，所用试剂均为分析纯。
    2 方法与结果
    2．1 色谱条件的选择
    以十八烷基键合硅胶为填充剂。流动相为乙腈：水(15：85)，检测波长243nm．流速为1.0ml／min。
    2．2 标准曲线的绘制
    精密称取干燥至恒重的芍药苷对照品5．12 mg，置25 ml量瓶中．加甲醇溶解并稀释至刻度．摇匀，即得。精密量取此液2.5，5.0，10，15，2O，25m1．照上述色谱条件测定。结果表明芍药苷峰面积积分值y与浓度X呈良好的线性关系。回归方程为Y=1.00×1000000000X+3.45×1O0000相关系数r=0.9997(线性范围0.512～5.12mg)。
    2．3 样品溶液的制备与测定
    精密量取养肝澳平合剂5m1．置三角烧瓶中。以甲醇为溶媒．超声提取4次。加甲醇15ml／次。提取l5min．过滤、合并虑液于蒸发皿中，水浴蒸去甲醇，残渣再加乙腈：水(15：85)溶解并转移至25 ml溶量瓶中。继续加乙腈：水(15：85)稀释至刻度。摇匀。用微孔滤膜(O.45m1)滤过，取续滤液即得。吸取样品溶液10ml注入HPLC仪．测定不同批号合剂中芍药苷含量。
    2．4 回牧率测定
    精密量取已知含量的养肝澳平合剂5ml。共5份，每份精密加入芍药苷适量，用样品溶液制备方法制备并依法测定。
    2．5 精密度实验
    精密吸取2．3项下制备的供试品溶液1Om1．注入HPLC仪。测得芍药苷峰面积积分值相对偏差(RSD)为1.35%。
    2．6 重现性实验
    精密吸取2．3项下制备的供试品溶液10μ1注入HPLC仪测定。
    3 讨论
    经过实验采用反相高效液相色谱法测定．经加样回收实验及重现性实验取得较好效果。从4次样品测定可看出，芍药苷(C23H28011)最高为0.64mg／ml。最低为0.46mg／m1．建议该制剂芍药苷的含量不低于0.4Omg／ml。该方法具有分离子．灵敏度高、准确度高等特点，可以作为含芍药苷有效成分中药制剂的质控标准。

参考文献：
[1] 李益福，李践．章建民．中药丹皮木心药用价值研究一芍药甙的定性鉴别和含量浏定D]．中草药。1994．25(11)；58~580．