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穿山龙含量测定方法(薯蓣皂苷元)

来源:药物分析网
摘要:穿山龙为薯蓣植物穿龙薯蓣DioscoreanipponlcaMskino的干燥根茎。2005版《中国药典》一部采用高效液相色谱法,以薯蓣皂苷元为对照测定其含量。文献报道的常用的含量方法为高效液相色谱法、薄层扫描法等。一、高效液相色谱法2005版《中国药典》穿山龙含量测定项下:色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶......

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    穿山龙为薯蓣植物穿龙薯蓣Dioscorea nipponlca Mskino的干燥根茎。2005版《中国药典》一部采用高效液相色谱法,以薯蓣皂苷元为对照测定其含量。文献报道的常用的含量方法为高效液相色谱法、薄层扫描法等。
    一、 高效液相色谱法
    2005版《中国药典》穿山龙含量测定项下:
    色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(84:16)为流动相,测波长为203nm。理论板数按薯蓣皂苷元峰计算应不低于4000。
    供试品溶液的制备:取本品粉末(过四号筛)约1g,精密称定,置锥形瓶中,加甲醇50ml,超声处理(功率250W,频率33kHz)30分钟,滤过,滤渣用甲醇20ml洗涤,合并甲醇液,回收甲醇蒸干,残渣加3mol/L盐酸溶液20ml(10ml,5ml,5ml)溶解,依次转移至锥形瓶中,水浴加热水解30分钟。取出,放冷,加入三氯甲烷30ml,加热回流15分钟,用三氯甲烷30ml,同法处理一次,滤过,再用三氯甲烷30ml洗涤容器及残渣,合并三氯甲烷液,回收三氯甲烷至干,残渣加甲醇溶解并转移至25ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
    文献报道的方法,一般使用甲醇-水和乙腈-水系统为流动相,现总结如下:
    ①美国Waters高效液相色谱仪,大连依利特公司产Hypersil C18 ODS柱(4.6mm×250mm,5μm)。流动相:乙腈-水(54:46);流速:1.0ml/min;检测波长210n;柱温为室温。供试品溶液甲醇超声处理。(李克明等“高效液相色谱法测定柴黄益肾颗粒中薯蓣皂苷的含量”,中日友好医院学报2005年第19卷第3期)
    ②高效液相色谱SHIMADZULC-6A 系统Shim-pack CLC-ODS 150×60mm, 5μm,带保护柱。甲醇-水(95:5) 为流动相;检测波长209nm;;流速1.0mL/min;柱温:25℃。样品溶液的制备: 样品经干燥、粉碎后准确称取1g,置索氏提取器中用60mL95%乙醇提取至馏出液无色。然后将乙醇提取液于旋转蒸发器中回收溶剂,残渣加20mL2mol/LHCl加热回流2.5h。冷却溶液,不必过滤分离,直接用30mL氯仿分3次回流萃取,每次15min。合并氯仿萃取液于旋转蒸发器中回收溶剂,残渣用流动相溶解并定容为10mL, 制成样品溶液。(杨文远等“反相高效液相色谱法测定中药中薯蓣皂苷元”分析试验室,第21卷第1期2002年1月)
    ③Waters 高效液相色谱仪。Lichrospher C18柱(5μm,250mm×4.6mm);流动相:乙腈-水(50:50);流速1ml/min;检测波长210nm。样品用50%甲醇超声处理。(刘源等“反相高效液相色谱法测定穿山龙中薯蓣皂苷的含量”,江西中医学院学报2004年8月第16卷第4期)
    ④日本岛津LC210Avp 高效液相色谱仪;Shim-pack CLC-ODS 色谱柱(6.0mm×150mm ,5μm);流动相:甲醇-乙腈(3:2);流速1mL/min;检测波长206nm;柱温30℃。供试品溶液的制备: 穿山龙细粉加乙醇水浴回流20min,提取3次,以少量乙醇洗涤滤渣,合并乙醇液,挥干。残渣加1mol/L1硫酸20mL,沸水回流5h,取出,冷却,移置分液漏斗中,用少量水超声洗涤容器,并入分液漏斗中,加氯仿萃取3次,每次10mL,合并氯仿液,用水洗涤2次,每次20mL,挥干氯仿,残渣加甲醇使溶解,移置10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,离心,取上清液即得。(徐雄良等“RP-HPLC法测定穿山龙中薯蓣皂苷元的含量”,中国中药杂志,第28卷第9期2003年9月)

    二、 分光光度法
    王俊等用分光光度法测定薯蓣皂苷元的含量,采用UV756 型紫外可见分光光度计,高氯酸反应使薯蓣皂苷元显色, 410nm 波长处检测。样品溶液的制备:准确称取干燥(60℃,3 h) 过的穿山龙粗粉5.00g,置圆底烧瓶内, 加2.5mol/L稀盐酸50mL水浴加热至98℃,回流水解5 h ,倾出,加饱和石灰水中和至pH=7,真空抽滤,滤渣用蒸馏水洗涤3次,80℃下干燥。在索氏提取器的底部烧瓶中加入1.0g活性炭和150mL石油醚,90℃水浴加热回流,至TL 法检测已提取干净为止。提取完毕后,滤去活性炭,用新鲜的石油醚反复洗涤活性炭,合并滤液和洗涤液, 真空浓缩, 将浓缩液过滤并定容到100mL,作为样品溶液。

作者: 2007-6-29
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