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1．适用范围：
本方法采用高效液体色谱法，测定整个胡椒、胡椒粉及其萃取物(胡椒油)中的胡椒碱含量。如有必要，该方法通过分离也可用于测定胡椒中的其他生物碱。
2．原理概要：
2．1 研磨胡椒
在回流下用乙醇萃取试样，然后按本标准的操作程序，用高效液体色谱(HPLC)测定胡椒碱含量。
2．2 全胡椒
试样经研磨，得到的粉末进行萃取，然后按本标准的操作程序，通过高效液体色谱(HPLC)测定胡椒碱含量。
2．3 胡椒油
胡椒油先用乙醇稀释，然后按本标准的操作程序，通过高效液体色谱(HPLC)测定胡椒碱含量。
3．主要仪器和试剂：
3.1.仪器
常规实验室仪器，主要有：移液管(2ml、5ml和10ml)、容量瓶(25ml、50ml和100ml)、过滤隔膜、分离系统(高效液体色谱仪、泵送系统、溶剂脱气系统和合适的检测系统)、记录仪或积分器、色谱柱(材料为不锈钢管或玻璃管；长度约10cm～25cm；内径0.4cm～0.5cm；固定相为希有C18功能团的硅胶，粒径为5μm)、注射系统、测试筛(500μm)。
3.2.主要试剂
试剂要用分析纯，水要用蒸馏水或至少同等纯度的水。主要试剂有：参比物(胡椒碱，纯度至少98％)、溶剂(乙醇、乙腈、乙酸)、洗提溶剂(52:48的乙酸/乙腈混合液)。
4．过程简述：
4．1 采样
重要的一点是取样应具有代表性，样品在运输或储存时未被破坏或发生改变。取样可参照ISO 948。
4．2 样品制备
分粉末状胡椒、全胡椒和胡椒油三类分别制备试样。
对全胡椒和研磨胡椒，称取0.5g～1g制好的试样，放入圆底烧瓶中，固定好回流冷凝器，加入50ml乙醇，回流蒸沸3h。溶液冷却，过滤，滤液收集到100ml容量瓶中，淋洗萃取瓶，洗液加入容量瓶，并用乙醇稀释到刻度线。
用移液管移取10ml萃取溶剂，加到25ml容量瓶中，用洗提溶剂稀释至刻度线。
对胡椒油，称取约0.2g椒油，精确到0.1mg，移入100ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻线。
用移液管移取10ml混合物，加到50ml容量瓶，用洗提液稀释至刻线。
4．3 测试
最终的洗提物应是清彻的，否则需过滤。然后将溶液注入色谱，测定胡椒碱峰，从而确定其含量。
需用参比溶液做校准曲线，计算出响应系数，K。
5．精确度：
对响应系数和胡椒碱含量，相同试验者在短期内，多次试验(3次以上)得到结果的平均值的偏差不超过5%。
6．来源：
国际标准化组织，ISO 11027：1993(E)