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1.适用范围：
本方法采用高效液体色谱(HPLC)，适用于干脱脂奶中维生素A含量的测定。每克干奶中维生素A含量至少为10 IU(国际单位)。
2.原理概要：
试样经皂化和萃取，并用HPLC从杂质中分离出维生素A。其含量可用紫外检测器或荧光检测器进行测定。
3.主要仪器和试剂：
3.1仪器
常规实验室仪器。主要有：液体色谱、色谱柱(不锈钢材质，250mm×4.6mm，装填10μm颗粒尺寸的C8或C18填料)、烧杯或锥形瓶(250ml)、皂化瓶(200ml,带回流冷凝器)、容量瓶(100ml和200ml)、移液管(10ml,25ml和50ml)、蒸汽浴、沸水浴或电炉、水浴(最高可达40℃)、分液漏斗(500ml，最好带聚四氟乙烯盖)、超声波浴、滤纸。
3.2 主要试剂
所用试剂除非另作说明外，均应为分析纯，水用蒸馏水或脱盐水，或至少同等纯度的水。主要试剂有：乙醇(95％，无醛)、抗坏血酸钠溶液(200g/l)、氢氧化钾水溶液[50％(m)]、氢氧化钾水乙醇溶液(30g/l)、轻质石油馏分(沸点40℃～60℃，或60℃～80℃)、甲醇(HPLC级)、移动相、丁基化羟基甲苯(BHT)。
4.过程简述：
4.1 样品制备
取样见ISO 707。最重要的是取样要有代表性，样品在运输和储存中不被破坏或组分发生改变。
制样时应使试样充分混合。
4.2 测试
称取约20g干奶试样，精确至0.001g，移至烧杯或锥形瓶中。加入50ml至少80℃的热水，用超声波浴使试样充分溶解，然后冷却至室温。将其全部移至100ml容量瓶中，用水稀释至刻度。
移取25ml制好的试样至皂化瓶中，加入20ml氢氧化钾和10ml抗坏血酸钠溶液，50ml乙醇，混合均匀。在蒸汽浴上回流皂化。用轻石油馏分进行萃取。
制备试样和参比溶液，并在水浴上减压蒸干，残渣立即溶于10.0ml甲醇中。
向色谱柱中注入20μl试样溶液和参比溶液，调整检测器的操作条件，得到最大的维生素A的单峰，测定峰面积。
5.精确度
重复性：相同试验者使用相同设备在短时间间隔内，采用相同试验方法对理想的试验材料进行分析，得到的两个单一的测量值的绝对偏差大于标本平均值的14%的可纯不超过5％。
再现性：不同试验者使用不同设备，采用相同试验方法对理想的试验材料进行分析，得到的两个单一的测量值的绝对偏差大于标本平均值的4.2%的情形不超过5％。
6.来源：
国际标准化组织，ISO 12080-2：2000(E)