气相色谱内标法测定八角茴香油中茴香脑的含量

方法：采用气相色谱内标法，以萘为内标，测定八角茴香油中茴香脑的含量。结果：茴香脑在4．12—32．96btg范围内呈良好的线性关系，－－y-~加样回收率为96．28％，RSD=1．o9％。结论：气相色谱内标法简便、准确，重现性好，可作为茴香油的质量控制方法之一。
八角茴香油为木兰科植物八角茴香Illicium vcrttm Hook．f．的新鲜枝叶或成熟果实经水蒸汽蒸馏得到的挥发油，具有芳香调味及健胃作用，是广西的特产中药
 
    1 仪器与试药
    GC-9310气相色谱仪，WH-500工作站。
    茴香脑对照品（trans—Anetho1）[由美国Sigma公司提供，lot：S16146—453，含量99％ （GC）]；萘（分析纯，含量99％）；醋酸乙酯（分析纯）；八角茴香油对照药材（由中国药品生物制品检定所提供，批号1545—200001）；八角茴香油样品（桂林市维威制药有限公司产品，批号：030501、030502、030503、 030601、030602、030603、030604、030701、030702、030703）。
    2 方法与结果
    2．1 色谱条件填充色谱柱：以聚乙二醇（PEG）一20M和硅酮（OV—l7）为固定液，涂布浓度分别为10％和2％，涂布后的载体以7：3的比例（重量比）装入同一柱内（PEG在进样口端），长度为2m；程序升温：柱子初始温度100℃，保持5min；以4℃／min升至140℃，保持5min，以l0℃／min升至200℃ ，保持5min；进样口温度：250℃；检测器：FID，温度250％；载气N 2：60ml／min；助燃气air：50ml／min；燃气H2：60ml／min；进样量：lμl。在上述色谱条件下分别进样测定，结果表明理论板数按茴香脑峰计算不低于10 000，茴香脑峰和内标物萘均与相邻组分色谱峰达到完全分离，分离度大于1.5，茴香脑保留时间约为15min， 内标物萘保留时间约为13min。
 
    2．2 对照品溶液的制备 精密称取茴香对照品2．06g于25ml量瓶中，以醋酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，作为茴香脑对照品溶液。
    2．3 内标溶液的制备 精密称取萘1．26g于25 ml量瓶中，以醋酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液。
    2．4 供试品溶液的制备 取八角茴香油0．18g，精密称定，置10ml量瓶中，精密加入内标溶液2ml，加醋酸乙酯稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。材。《中国药典》2000年版一部收载的八角茴香油标准无含量测定项目【1】。据文献报道，八角茴香油中含茴香脑、草蒿脑、茴香醛等成分【2－5】，其中茴香脑是主要有效成分【6，7】 ，目前茴香脑的含量测定多采用气相色谱法【2－5】，而用气相色谱内标法测定八角茴香油中茴香脑的含量未见报道。由于气相色谱法进样量少，采用内标法可减少误差，为提高方法的重现性，本文建立了气相色谱内标法测定八角茴香油中茴香脑含量的方法，结果较为满意，可作为该药材质量控制的方法。
    2．5 线性关系的考察分别精密吸取上述对照品溶液0．5、1、2、3、4ml，分别置10ml量瓶中，各精密加入内标溶液2ml，以醋酸乙酯稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件，各进样lμl，进行测定。以茴香脑峰面积积分值和萘峰面积积分值的比值y对茴香脑进样量 进行回归分析，得回归方程：Y：0．07509X一0．005997．r=1．0000。表明茴香脑进样量在4．12—32．96μg范围内线性关系良好。
    2．6 校正因子的测定 精密称取萘1．25g，置25ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液。精密称取茴香脑对照品2．00g，置25ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，作为茴香脑对照品溶液。精密量取上述对照溶液和内标溶液各2ml，置10ml量瓶中，加醋酸乙酯稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。（即lμl含茴香脑16μg；含萘10μg）。取lμl注入气相色谱仪，连续进样6次，按平均峰面积计算校正因子，结果校正因子为1．3154，RSD=0．15％（n=6）。
    2．7 精密度与重现性试验取同一供试品溶液，连续重复进样6次，以茴香脑峰面积积分值对萘峰面积积分值的比值计算相对标准偏差，测得平均值为1．2372， RSD =1．64％ 。精密称取同一批样品6份，品溶液，依法进样测定，以茴香脑的百分含量（g／g）计算相对标准偏差，平均含量为90．60％ ， RSD =0．15％。
    2．8 加样回收率试验 精密称取已测知含量的样品（平均含量90．72％）0．09g于10ml量瓶中；分别精密加入茴香脑对照品溶液lml及内标溶液2ml，以醋酸乙酯稀释至刻度，摇匀。精密吸取1 l进样测定，计算回收率，平均回收率96．28％ ，RSD=1．09％（n=5）。
    2．9 样品测定按“校正因子测定及供试品溶液的制备"项下操作制备校正因子及样品溶液，然后分别精密吸取校正因子溶液1 l连续进样3次，测定校正因子；精密吸取供试品溶液ltal，进样测定2次，以内标法计算样品中茴香脑的百分含量（g／g），各约0．18g，按2．4项方法制备供试 结果见表1。表1 样品含量测定结果 （n=2）
    3 讨论
    目前茴香脑的含量多采用气相色谱面积归一法测定其相对含量，具有一定的局限性，由于气相色谱法进样量少，采用内标法可减少实验误差。提高方法的重现性，本研究结果表明，气相色谱内标法简便、准确、重现性好，可为八角茴香油及其制剂的质量控制方法提供参考。