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荧光法测定肾宝合剂中的总蒽醌含量

来源:求医问药
摘要:肾宝合剂是由淫羊藿、何首乌、川芎、红参等22味中药组成的口服制剂,有调和阴阳、温阳补肾、安神固精、扶正匿本等功效,主治阳痿、遗精、腰腿酸重、精神不振、夜尿频多畏寒怕冷及妇科经带诸证。有关文献以淫羊藿苷的含量来控制肾宝糖浆的质量,但选用其他成分来控制其质量的方法未见报道。已有研究证实用薄层色谱法能检出......

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  肾宝合剂是由淫羊藿、何首乌、川芎、红参等22味中药组成的口服制剂,有调和阴阳、温阳补肾、安神固精、扶正匿本等功效,主治阳痿、遗精、腰腿酸重、精神不振、夜尿频多畏寒怕冷及妇科经带诸证。方中制首乌具益精髓、长筋力、壮气驻颜、黑发延年之功,其主要成分蒽醌类的含量澳定方法有TLC法、HPLC法和比色法。有关文献以淫羊藿苷的含量来控制肾宝糖浆的质量,但选用其他成分来控制其质量的方法未见报道。已有研究证实用薄层色谱法能检出何首乌,因此本文首次采用荧光分光光度法测定谚成分含量,并优化其提取工艺及测定条件,进行系统方法学考察,为更好地控制肾宝合剂的质量提供一定依据。

  1仪器与试药

  岛津RF~5000荧光分光光度计。I<Q一5200型超声波清洗器:昆山超声仪器有限公司。BSll0S电子天平:北京赛多利斯天平有限公司。

  大黄素对照品:由中国药品生物制品检定所提供,批号:110756—200110。肾宝合剂:浙江松寿堂中药有限公司,规格为每瓶200ml,批号为:20060308。所用试剂均为分析纯。2方法与结果

  2.1对照品、供试品和阴性对照品溶液的制备

    2.1.1对照品溶液的制备精密称量大黄素对照品1.2mg,用无水乙醇定容至10ml,即得浓度为0.12mg-ml,的标准品液。

  2.1.2供试品溶液的制备精密吸取肾宝合剂5ml,挥干,加8%盐酸溶液10ml,超声处理2分钟,加氯仿10ml,加热回流60分钟,冷却后置分液漏斗中,用少量氯仿洗涤容器,并人分液漏斗,分取氯仿层,酸液用氯仿萃取3次,每次10ml,合并氯仿液,减压回收至干,残渣加无水乙醇溶解,定容于10ml量瓶,微孔滤膜滤过,即得供试溶液。

  2·1.3阴性对照品溶液的制备精密吸取缺何首乌药材的肾宝合剂5ml,其余操作同“2.1.2”,依法制备,得阴性对照品溶液。

  2·2检测波长的确定精密吸取大黄素对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10μl,置2ml量瓶中,用无水乙醇溶液定容后,在300~600rim波长范围扫描,测得对照品溶液和供试品溶液的最佳激发波长为λ=440nm,最佳发射波长λ=515nm,而阴性对照品溶液和溶剂在该条件下则无荧光。故选用λ=440111n,λEM=515nm处的荧光作为测定总蒽醌的定量依据。

  2.3pH条件选择不同浓度盐酸乙醇溶液的配制:取6个25ml容量瓶,各加入3%盐酸溶液0.0,5.0,15.0,25.0,35.0,45.0μl,加无水乙醇定容后得不同浓度盐酸乙醇溶液。另取2ml容量瓶加大黄素标准品液适量,各加不同浓度的盐酸乙醇溶液至刻度,在λ=440nm,λEM=515nm处测定荧光强度。结果表明用加入3%盐酸5.ota配制盐酸乙醇溶液时,所测荧光最强。故实验中选择加入3%盐酸5.0μl配制的盐酸乙醇溶液定容后测定大黄素的荧光强度。

  2.4标准曲线的制备精密吸取标准品液0.O,0.4,0.8.1.2,1.6,2.0μl,分别置2ml量瓶中,加入3%盐酸5.0ul配制的盐酸乙醇溶液定容后,摇匀,在λ=440nln,λ=515nm处测定荧光强度。以浓度C(μg)为横坐标,荧光强度F为纵坐标,求得回归方程:F=1970.3c+30.60,r:0.9991。结果表明在0.048~0.24,ug范围内,大黄素浓度与荧光强度呈良好的线性关系。

  2.5稳定性试验取供试品溶液,按拟定条件分别在0.5、2.0、8、16、24小时测定荧光强度,结果RSD为1.02%。

  2.6精密度试验精密吸取对照品溶液10μl置2ml量瓶中,加入3%盐酸5.0μl配制的盐酸乙醇溶液定容后,摇匀,按拟定条件重复测定6次,结果RSD为1.33%。

  2.7重现性试验

  精密吸取肾宝合剂样品溶液80td置2ml量瓶中,加入3%盐酸5.0fd配制的盐酸乙醇溶液定容后,摇匀,按拟定条件重复测定5次,结果RSD为0.69%。

  2.8回收率试验精密吸取已知总蒽醌含量的肾宝合剂(浙江松寿堂)2.5ml,加已知浓度的对照品溶液适量,按供试品液的制备方法制备供试品液,按标准曲线项下方法测定总蒽醌的含量,计算回收率,结果平均回收率为98.1%,RSD为1.88%.

 

作者: 2009-4-4
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