复方疮疡搽剂中没食子酸的含量测定

　　复方疮疡搽剂由金银花、大黄、五倍子、柯子、当归、黄柏、乌梅等组成。具有清热解毒、敛疮止血、抗菌消炎的功效。主要用于治疗各种溃疡、外伤出血、痈、肿、疔、疖等症。方中五倍子、柯子、乌梅具有收敛止血、抗菌消炎之功效，其主要成分为没食子酸，为疮疡搽剂中的有效成分之一。本实验对样品预处理后，用甲醇回流提取，采用HPLC法对疮疡搽剂中的没食子酸进行含量测定，以对其质量进行控制。本法取样量少，操作简便，精密度高，分离良好。

　　1仪器和试药

　　1．1仪器

　　Agilent1100高效液相色谱仪；KromasilC18色谱柱；G1315BDAD检测器；自动进样器；四元泵；Agilent1100化学工作站。

　　1．2试药

　　没食子酸对照品(0831—9501)：中国药品生物制品鉴定所；样品：自制(批号：000213，000214，000215，000216，000217)；甲醇：色谱纯(天津市四友生物医学技术有限公司)；磷酸：分析纯(广东汕头西陇化工厂)；所有色谱用试剂均用O．45gm微孔滤膜过滤；水为重蒸馏水；其它试剂均为分析纯。

　　2方法与结果

　　2．1色谱条件

　　色谱柱KromasilC18250×4．6mm5μm；流动相：甲醇一0．025％磷酸水溶液(4：96)；流速lmL／min；检测波长275nm柱温：25~C；进样量：lμL；分析方法：外标法。

　　2．2检测波长的选择

　　取没食子酸对照品适量，用流动相溶解并稀释，于200～400nm处进行UV扫描，从其紫外图谱中可见其在220nm、275nm处有最大吸收，但在220nm检测波长下，流动相中甲醇及样品中其他物质的紫外吸收干扰较大，基线不稳，故选择275nm为检测波长。

　　2．3系统适应性试验

　　分别按照2．5、2．6项下方法制备对照品溶液及供试品溶液，按2．1项下色谱条件，各进样5μμm，同时采集200～400nm光谱数据，结果显示，供试品溶液相应色谱峰的光谱与对照品没食子酸一致，并经Agilent1100化学工作站纯度分析，色谱峰纯度符合规定。没食子酸对照品保留时间为10．7min，理论塔板数大于3000。故将最小理论塔板数定为不低于3000。

　　2．4流动相的选择

　　文献报道没食子酸的测定方法很多，主要以薄层扫描法和高效液相色谱法[2、3]为主。参考文献报道的方法试验，流动相用甲醇一水(5：95)，水一乙酸(98：2)，甲醇一冰醋酸一N，N二甲基酰胺一水(1；3：15：81)E4~，甲醇一O．5％冰醋酸(15：85)，在该制剂中没食子酸的分离效果均不佳，初步选择甲醇一O．025％磷酸水溶液(30：70)作流动相，没食子酸与其他组分色谱峰分离虽然较前几种流动相效果好，但仍不佳，考虑到没食子酸显酸性，故流动相的pH值对没食子酸的分离影响较大[5]，通过不断改变甲醇与磷酸水溶液的比例及流速，选定甲醇一0．025％磷酸水溶液(4：96)及流速lmL／min比较合适，分离度好且保留时间适宜，而且在不断调节pH值的过程中证明流动相的pH值确实对没食子酸的分离影响较大。

　　2．5对照品溶液的配制

　　精密称取减压干燥至恒重的没食子酸对照品，加甲醇制成0．108mg／mL的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的配制精密吸取样品(批号：000213)10mL，水浴蒸干加甲醇10mL超声处理300min，滤过，甲醇定容于10mL容量瓶中，摇匀即得。

　　2．6供试品溶液的配制

　　精密吸取样品(批号：000213)10mL，用lmol／LNaOH调pH值至7，过滤，滤液用氯仿萃取3次，每次10mL；弃去氯仿液，水液用稀盐酸调pH值至3，过滤，滤液水浴蒸干；40mL甲醇回流30min，放冷，滤过，回收甲醇，定容于10mL容量瓶中，以0．45／~m微孔滤膜滤过，备用。

　　2．7线性关系考察

　　精密吸取上述对照品溶液1、2、4、6、8、10μL进样测定。以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标。测定结果，得到回归方程为：Y一4118．381X+12．277854，相关系数：r=0．9997，线性范围：O．1038～1．0382ug。

　　2．8精密度实验

　　精密吸取对照品溶液5μL，重复进样5次，进行精密度实验。结果峰面积的RSD(n=5)一O．42％。证明本法有较高的精密度。

　　2．9稳定性实验

　　取同一批号本品(000213)，按供试品项下方法处理后，分别于O、1、2、4、6h进样，进样量为2μL，测得其没食子酸的平均峰面积值为2497，RSD为4．24％，表明样品中没食子酸的含量在6h内稳定。

　　2．10重复性实验

　　取同一批号本品(000214)，平行制备5份样品，按样品测定法测定，并对所得数据进行处理，结果测得没食子酸平均含量为O．326mg／mL，RSD为0．59％。

　　2．1l样品测定

　　取5批样品依法制得供试品溶液，进样量1μL，分别依法测定，按外标法计算没食子酸含量。

　　2．12加样收率实验

　　精密吸取已知含量的样品(批号为000216)10mL，分别加入没食子酸对照品，依法处理制成供试品溶液，进样测定，计算回收率，结果见表3，表明样品中其他成分对实验结果无显著影响。

　　3讨论

　　(1)该制剂中的五倍子、柯子、乌梅、大黄中均含有没食子酸，且这4味药占组方的50％，没食子酸又是其中一科有效成分。故为了保证药品质量及疗效，必须测定没食子酸的含量。

　　(2)样品提取时，根据没食子酸的溶解性及参考文献，选用甲醇回流，放置过夜，超声处理进行比较，结果表明甲醇回流效果最佳。对回流30、40、60min的结果比较，表明没食子酸含量相差不大，故选用回流30min提取。

　　(3)由于没食子酸为可水解鞣质的结构单元，本篇样品中没食子酸的提取采用甲醇回流加热提取，使样品中可水解鞣质水解出没食子酸，因此本篇测定的是样品中的游离没食子酸和水解出的没食子酸的总量之和[6l。若采用超声提取，提取的主要为游离没食子酸，含量较低。

　　本篇通过实验研究，建立了疮疡搽剂中没食子酸含量的HPLC测定法，本法取样量少，方法简单，重现性好，结果准确，可作为质量控制分析方法，为没食子酸的含量测定提供了一种可借鉴的、行之有效的方法。