高效液相色谱法测定防芷鼻炎片中甘草酸含量

　　防芷鼻炎片由苍耳子、野菊花、胆南星、甘草等药味组成，具有清热消炎、祛风通窍的功效，用于治疗慢性鼻炎引起的打喷嚏、鼻塞、头痛、过敏性鼻炎。为了有效控制该制剂的质量，笔者采用高效液相色谱法(HPLC法)测定甘草中主要活性成分甘草酸的含量，测定结果令人满意。

　　l仪器与试药

　　Agilent1100型系列高效液相色谱仪，UV一2201型紫外一可见分光光度计(日本岛津公司)；CQX25-06型超声波清洗器(上海必能信超声有限公司)。防芷鼻炎片(广西玉林制药有限责任公司)；甘草酸铵对照品(中国药品生物{扫j品检定所，供含量测定用，批号为745—8701)；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

　　2方法和结果

　　2．1色谱条件

　　色谱柱：AgilentEclipseXDB—c18柱(250mmx4．6turn，5IJ．m)；流动相：甲醇一O．2mol／L醋酸铵溶液一冰醋酸(67：33：1)IJi；流速：1．OmL／min；检测波长：250nm；柱温：28℃；进样量：lOμL。理论塔板数按甘草酸铵峰计算应不低于2500。

　　2．2溶液制备

　　精密称取甘草酸铵对照品适量，加流动相溶解制成每lmL含O．092mg的溶液(每lmL含甘草酸铵O．20mg，折合甘草酸为O．1959mg)，摇匀即得对照品溶液。取本品24片，除去糖衣，研细，取约2．5g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，加入流动相约45mL，超声处理30min，取出，放冷，加流动相至刻度，摇匀．滤过，弃去初滤液，续滤液用0．45pan滤膜滤过，作为供试品溶液。按处方及制备工艺制备不含甘草的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

　　2．3方法学考察

　　空白试验：照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各lOμL，分别注入色谱仪测定。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照品溶液在此保留时间内无干扰(见图1)。因此可在此系统条件下对甘草酸进行定量分析。

    　　线性关系考察：精密称取甘草酸铵对照品适量，置50mL量瓶中。加流动相溶解并定容，摇匀，制成质量浓度为O．193mg／mL的甘草酸铵对照品贮备液，分别精密吸取贮备液1．0，3．O，5．O，7．O，9．OmL，分别置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度。摇匀，制成质量浓度为O．0193，0．0579，O．0965，O．135l，0．1737mg／mL的系列溶液，分别精密吸取10p．L，注入液相色谱仪，记录峰面积。以对照品进样量(μg)为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为y=一1．37×lO-3x+7．28×lO-4(r=O．9992)。结果表明甘草酸铵进样量在0．193一I．737μg范围内与峰面积线性关系良好。 　　精密度试验：精密吸取同一供试品溶液，按上述色谱条件进行分析，重复进样6次。结果峰面积均值为l310，RSD=O．98％。 　　重现性试验：平行制备防芷鼻炎片(批号为545001)的供试品溶液6份，照2．1项下色谱条件进行测定。结果平均含量为1．54mg／g，RSD：1．25％。 　　稳定性考察：精密吸取供试品溶液10ttL，分别在0，2，4，6，8，lO，12h时进样1次，测定峰面积。结果的RSD=1．05％，表明供试品溶液在12h内稳定。 　　加样回收试验：称取已知含量为1．541lmg／g的防芷鼻炎片除包衣药粉1．2g，精密称定，分别精密加入质量浓度为O．193mg／mL的对照品贮备液适量，照2．2项下方法制备供试液，依法测定，计算回收率，结果见表l。  

　　按2．2项下方法分别制备对照品溶液和供试品溶液，精密吸取10μL，注入色谱仪，在上述色谱条件下测定，结果批号为545001，544006，445004的3批样品中甘草酸含量分别为1．5411，1．5322，1．5326mg／g。

　　3讨论

　　3．1在提取过程中，曾用甲醇、流动相、稀乙醇、氨水等不同的溶剂提取。用流动相作为提取溶剂时，得到的色谱峰峰形较好，能达到基线分离。还比较了浸泡与不浸泡的提取情况，结果提取的甘草酸含量差不多，所以选择了简单的直接超声处理。

　　3．2用甘草酸铵作为对照品，是因为在流动相含有醋酸时。甘草酸铵和甘草酸的保留时问是一致的(在计算含量时，须将甘草酸铵的量折算成甘草酸的量)，不影响测定结果。