点击显示 收起
来源：中国色谱技术网
摘要：目的：建立奥匹神胶囊中枸杞子的定性和腺苷的定量指标。方法：采用TLC法对制剂中的枸杞子进行定性鉴别；用HPLC法测定腺苷的含量。结果：在TLC色谱中能较好检出枸杞子；腺苷在0.1792～0.5376μg范围内呈良好的线性关系，r=0.9998，平均回收率为97.7％，RSD=1.73％。结论：所建立的方法可准确地进行定性、定量检测。可用于该制剂的质量控制。
关键词：奥匹神胶囊；虫草头孢茵粉；枸杞子；腺苷
奥匹神胶囊系由虫草头孢菌粉、活性钙、熟地黄、枸杞子等药味制成的复方制剂，具有补钙和雌性激素样作用，可用于防治骨质疏松症、筋骨疼痛等。原标准只建立了腺苷的薄层色谱鉴别及活性钙含量测定等质量控制指标。为更有效控制本品质量，本文采用薄层色谱法对方中所含枸杞子进行了薄层色谱鉴别，并利用高效液相色谱法分离，测定本品中贵重药虫草头孢菌粉腺苷的含量。
1、仪器与试药
Waters高效液相色谱仪(美国)；ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)；薄层铺板器(重庆)；METTLERAE240天平(瑞士)；SB3200超声清洗器(上海)；硅胶G(青岛海洋化工厂)；其他试剂均为分析纯。腺苷(含量测定用，批号879-200001，中国药品生物制品检定所)；枸杞子对照药材(批号20000628。20000630。20000702)；缺枸杞子阴性对照品、缺虫草头孢菌粉阴性对照品(自制)。
2、枸杞子薄层鉴别试验
取本品内容物5g，加乙醇30mL超声提取30分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加10mL水溶解，稀盐酸调pH至5，用醋酸乙酯振摇提取2次，每次15mL，合并醋酸乙酯液，浓缩至1mL，作为供试品溶液。取缺枸杞子阴性对照品5g，同法制成缺枸杞子阴性对照品溶液。另取枸杞子对照药材0.5g，加水35mL，加热煮沸15分钟，放冷，滤过，滤液用醋酸乙酯15mL振摇提取，提取液浓缩至约1mL，作为枸杞子对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VIB)试验，吸取上述枸杞子对照药材溶液5μL，供试品溶液和缺枸杞子阴性对照品溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-氯仿-甲酸(3：2：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。而阴性对照品无此对照斑点。
3、腺苷的含量测定
3．1色谱条件色谱柱：C18柱(4.6mm×250mm)。流动相：2％四氢呋喃的磷酸缓冲溶液[0.066mol／L磷酸二氢钾溶液一0.066mol／L磷酸氢二钠溶液(4：6)]。检测波长：260nm。流速：1mL／min。柱温：室温。理论塔板数按照腺苷峰计算不得低于3000，外标两点法定量计算。
3．2标准曲线的制备精密称取105℃干燥至恒重的腺苷对照品0.00448g，置50mL量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀(腺苷含量0.0896mg／mL)，作为腺苷对照品溶液。精密吸取对照品溶液2、3、4、5、6μL依次进样，测定峰面积。以进样量(μg)对峰面积进行回归，并绘制标准曲线。得回归方程：Y=2711513.33X+28123.09，，r=0.9998，结果表明，腺苷在0.1792～0.5376μg范围内呈良好的线性关系。
3．3样品的含量测定取本品装量差异项下的内容物。取2.5g，精密称定，置50mL量瓶中，加入稀乙醇约40mL，振摇，超声处理(250W，33kHz)30分钟，放冷，续加稀乙醇至刻度，静置，取上清液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，滤液作为供试品浴液。另取缺虫草头孢菌粉阴性对照品2.5g，按供试品溶液制备方法制得缺虫草头孢菌粉阴性对照溶液；分别精密吸取腺苷对照品溶液5μL，供试品溶液、缺虫草头孢菌粉阴性对照溶液各10μL，注入液相色谱仪，进行HPLC测定，可见供试品腺苷峰与对照品峰保持一致，且与其他组分可以很好地分离，而阴性不干扰腺苷的测定。外标法计算腺苷的含量。
3．4精密度及重现性试验精密度试验：精密吸取对照品溶液5μL，连续进样5次，测定峰面积积分值，结果RSD=0.64％。重现性试验：取批号20000628样品，按测定法进行5次测定，结果含量值为0.16mg／粒，RSD=1.84％。
3．5回收率试验精密取已知含量的样品2.5g，定量加入一定量的腺苷对照品，按样品测定项下，自“加稀乙醇40mL…”依法操作，测定峰面积，计算回收率。结果平均回收率为97.7％，RSD=1.73％(11：6)。
3．6样品测定结果用本文测定方法对3批奥匹神胶囊进行测定
4、讨论
(1)由于方中含活性钙，其主要成分为CaO，故稀乙醇提取液呈碱性，加稀盐酸调pH值后可较好检出枸杞子斑点。
(2)超声提取比较了10、20、30、60分钟不同提取时间的腺苷得率，结果表明提取时间30分钟即可提取完全。