小蓟的质量标准研究

【摘要】 目的建立小蓟药材的质量标准。方法运用薄层色谱法对小蓟中蒙花苷进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定蒙花苷的含量，色谱柱为Ultimate Column XB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水(51∶49)，检测波长为334 nm，流速1.0 ml·min-1，柱温25 ℃。结果薄层鉴别斑点清晰，重复性好;高效液相色谱法测定蒙花苷在0.006 58～2.964 μg之间峰面积与进样量呈良好线性关系(r=0.999 9)，平均加样回收率为100.7%，RSD为1.89%。结论该方法简单可行，重复性好，可作为小蓟药材的质量控制方法。

【关键词】  小蓟; 蒙花苷; 质量标准; 薄层色谱法; 高效液相色谱法

　Study on the Quality Standard of Herba Cirsii

　　KE Rui 1, 2，ZHU Enyuan1, 2, CHOU Guixin1, 2

　　(1. Key Laboratory of Standardization of Chinese Medicines of Ministry of Education, Key Laboratory for New Resources and Quality Evaluation of Chinese Medicines, Key Laboratory for Compound Chinese Medicine of shanghai, Institute of Chinese Materia Medica, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China; 2. Shanghai R&D Centre for Standadization of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China)

　　Abstract：ObjectiveTo establish the quality standard of Herba Cirsii. MethodsA TLC method was used for qualitative identification and at HPLC analysis was applied for quantitative determination of Herba Cirsii with linarin as the reference substances. The column was Ultimate Column XB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm), the mobile phase was the mixture of methanol-water(51∶49) with a flow rate of 1.0 ml·min-1, the UV detection wavelength was 334 nm and the column temperature was set at 25 ℃.ResultsThe TLC method was suitable for the identification of Herba Cirsii. A good linear relationship between the peak areas and injected amounts of linarin in the range of 0.006 58-2.964 μg , the average recovery was 100.7%(RSD=1.89%). ConclusionThe established method is simple and reproducible and can be used as quality control methods of Herba Cirsii.

　　Key words： Herba Cirsii; Linarin; Quality standard; TLC; HPLC

　　小蓟为菊科蓟属植物刺儿菜Cirsium setosum (Willd.) MB. 的干燥地上部分，全国各地均有分布，具有凉血止血、祛瘀消肿的功效，被临床广泛应用于治疗各种出血症及急慢性炎症、湿热证、疮疡等[1]。目前的化学成分研究和药理学研究揭示了黄酮类成分为小蓟止血、抗炎的主要活性成分[2, 3]。现行药典标准《中国药典》2005年版中，小蓟项下薄层鉴别以芦丁为指标进行定性鉴别，且无含量测定项，尚需修订与完善。根据作者前期的研究，蒙花苷在小蓟中的含量普遍较高，为主要的黄酮类成分，因此，本研究旨在建立以蒙花苷为指标成分的定性定量方法，为小蓟的质量控制提供参考。

　　1 仪器与试药

　　高效液相色谱仪(Agilent 1100型，包括四元泵、自动进样器、柱温箱、DAD检测器、Agilent 1100化学工作站，美国Agilent 公司);薄层色谱仪(Reprostar 3型，瑞士CAMAG公司);电热恒温水浴锅(DK-S24型，上海精宏实验设备有限公司);电子天平(Sartorius BT 124 S型，北京赛多利斯仪器系统有限公司);硅胶预制板(HSG，烟台江友硅胶开发有限公司)。蒙花苷对照品(由上海中药标准化研究中心提供，纯度>98%);甲醇为色谱纯，供试品制备用甲醇为分析纯，水为纯水。收集不同产地的小蓟药材共10批，经上海中药标准化研究中心吴立宏副教授鉴定为刺儿菜C. setosum的干燥地上部分。

　　2 方法与结果

　　2.1 薄层色谱鉴别取药材粉末1 g，加甲醇10 ml，超声提取30 min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取蒙花苷对照品，加甲醇制成每毫升含0.1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述供试品溶液5 μl，对照品溶液10 μl，分别点于同一硅胶HSG薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝乙醇溶液，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。结果见图1。S-蒙花苷对照品 1~10.不同来源小蓟药材供试品图1 小蓟药材的薄层色谱图

　　2.2 含量测定

　　2.2.1 色谱条件Ultimate Column XB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相为甲醇-水(51∶49);检测波长为334 nm;流速1.0 ml·min-1;柱温25 ℃。理论板数按蒙花苷峰计算应不低于2 000。对照品与供试品色谱图见图2。

　　2.2.2 对照品溶液的制备取蒙花苷对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成每毫升含50 μg的溶液，即得。

　　2.2.3 供试品溶液的制备取药材粉末(过3号筛)0.2 g，精密称定，精密加入80%甲醇60 ml，称定重量，80 ℃水浴加热回流3 h，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。A.对照品;B.供试品;1.蒙花苷图2 蒙花苷的高效液相图

　　2.2.4 检测限与定量限按信噪比(S/N)为3时计算，蒙花苷的检测限为1.98 ng;按信噪比(S/N)为10时计算，蒙花苷的定量限为6.58 ng。

　　2.2.5 线性关系考察取蒙花苷对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成每毫升含蒙花苷148.200 μg的对照品溶液。精密吸取该溶液，分别稀释成浓度为148.200，74.100，37.050，12.350，6.175，2.470，0.329 μg·ml-1的对照品溶液。分别精密吸取20 μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定。以对照品的进样量为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，得线性回归方程Y=915.45X+3.793，r=0.999 9。结果表明蒙花苷在进样量为0.006 58～2.964 μg之间呈良好的线性关系。

　　2.2.6 精密度实验分别取“2.2.5”项下高、中、低(148.200，37.050，6.175 μg·ml-1)3种不同浓度的对照品溶液，进样量20 μl，各重复进样6次，测得蒙花苷峰面积RSD分别为0.28%，0.11%和0.16%。

　　2.2.7 稳定性实验取同一小蓟(上海)供试品溶液，分别于配制后1，2，4，8，12，24，48，72 h进样，蒙花苷峰面积RSD为0.32%，表明小蓟样品中蒙花苷在72 h内稳定。

　　2.2.8 重复性实验取同一小蓟(上海)样品按“2.2.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，测得蒙花苷峰面积RSD为0.43%。

　　2.2.9 回收率实验取已测知蒙花苷含量的小蓟(上海，含量1.635%)样品粉末9份，约0.1 g，精密称定，每3份为一组，分别按已知含量的80%，100%，120% 3个水平加入蒙花苷对照品，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，测定蒙花苷的峰面积，计算加样回收率，得平均回收率为100.7%，RSD为1.89%。结果见表1。

　　2.2.10 样品测定取所收集的10批不同来源的小蓟药材，按上述建立的含量测定方法进行测定，采用外标法计算蒙花苷的含量。结果见表2。表1 蒙花苷加样回收率实验结果样品量m/g样品中含量m/mg加入量m/mg测得量m/mg回收率(%)平均回收率(%)

　　3 讨论

　　在薄层色谱鉴别中，分别考察了以下不同的展开系统：三氯甲烷-甲醇-水(4∶1∶0.1)，正丁醇-冰乙酸-水(8∶1∶0.5)，醋酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)。结果表明，醋酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)系统分离效果较好，并且所显示的信息较丰富。此外，作者还对不同厂家及规格的薄层板、不同的环境温度及湿度进行了考察，结果表明本方法耐用性良好。目前文献[4，5]所报道的小蓟中黄酮类成分的薄层鉴别方法均采用2005年版《中国药典》所收载的小蓟薄层鉴别方法，其中所采用的聚酰胺薄膜以及展开剂中的乙酰丙酮和丁酮为非常用试剂，不易获得，另外所用定性的指标成分芦丁在小蓟中含量甚低，且不具专属性。本实验采用硅胶板，以常用试剂为展开系统，选用蒙花苷为指标成分，首次建立了小蓟的定性鉴别方法，与现行标准比较，本法简便，可操作性强表2 小蓟中蒙花苷的含量样品编号收集地含量RSD(%)　　在小蓟供试品溶液制备方法的建立中，以蒙花苷提取率为指标，分别考察了提取方法(索式提取、超声提取、加热回流提取)，提取溶剂(乙醇、不同比例的甲醇-水)，提取溶剂倍数，提取时间及提取次数。确定了供试品溶液制备以80%甲醇回流提取3 h，提取1次，即可达到满意的结果。

　　通过对不同来源的10批小蓟中蒙花苷含量的测定，结果表明，蒙花苷在小蓟中的含量较高，且在各样品中的含量差异不大，最高含量为2.142%，最低含量为0.981%，平均含量为1.459%。建议小蓟中蒙花苷的含量应不低于1%。

【参考文献】
  　[1] 陈 毓，丁安伟，杨星昊，等. 小蓟化学成分药理作用及临床应用研究述要[J]. 中医药学刊，2005，23(4): 614.

　　[2] 周文序，田 珍. 中药大小蓟的黄酮类成分的分离和鉴定[J]. 北京医科大学学报，1994，26(4): 309.

　　[3] 杨星昊，崔敬浩，丁安伟. 小蓟提取物对凝血、出血及实验性炎症的影响[J].四川中医，2006, 24(1): 18.

　　[4] 刘 翔，倪晓霓. 小蓟质量标准研究[J]. 南京中医药大学学报，2006，22(4): 263.

　　[5] 崔敬浩，杨星昊，丁安伟，等. 小蓟、小蓟炭中黄酮类成分的含量测定和薄层鉴别[J]. 四川中医，2006, 24(3): 34.