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两种方法测定定喘胶囊中醋酸泼尼松的含量分析

来源:宁夏药品检验所
摘要:【摘要】目的建立测定定喘胶囊中违法添加醋酸泼尼松的方法。方法采用高效液相色谱法(HPLC)和薄层扫描法(TLC)测定。结果上述两种方法均检出定喘胶囊中违法添加的醋酸泼尼松,含量为每粒0。结论HPLC法和TLC法均有良好的专属性,两种方法连用可以准确检出醋酸泼尼松。...

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【摘要】 目的 建立测定定喘胶囊中违法添加醋酸泼尼松的方法。方法 采用高效液相色谱法(HPLC)和薄层扫描法(TLC)测定。结果 上述两种方法均检出定喘胶囊中违法添加的醋酸泼尼松,含量为每粒0.525mg。结论 HPLC法和TLC法均有良好的专属性,两种方法连用可以准确检出醋酸泼尼松。

【关键词】  高效液相色谱法;薄层色谱法;违法添加;醋酸泼尼松

              定喘胶囊是宁夏某医院自配的医院制剂,主要用于治疗哮喘,说明书中载明的处方有法半夏、莱菔子、白芥子等药材,未见含醋酸泼尼松的说明。笔者对服用此药患者提供的样品进行补充检验时发现,该批胶囊中违法添加了醋酸泼尼松成分。为了维护广大患者的合法权益,本文建立了定喘胶囊中醋酸泼尼松成分的定性鉴别和含量测定的方法,报告如下。

  1  仪器与方法

  1.1  仪器与试药:日立高效液相色谱仪:包括L6200泵、L4200紫外检测器、D2500数据处理器。醋酸泼尼松对照品由中国药品生物制品检定所提供,样品由患者提供,区外某专科医院配制,规格0.5g。硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂生产)甲醇为色谱纯,其它试剂均为分析纯。

  1.2  方法

  1.2.1  薄层色谱法(TLC):取样品10粒,倾倒出内容物至锥形瓶中,加氯仿20ml,超声处理20min,滤过,滤渣与滤器用氯仿10ml分次洗涤,合并洗液与滤液,置水浴上蒸干,残渣加氯仿2ml溶解,作为供试品溶液。另取醋酸泼尼松对照品,加氯仿制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法实验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以二氯甲烷-乙醚-甲醇-水(385∶60∶15∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,在105℃干燥10min,放冷,喷以碱性四氮唑蓝显色剂[1]。样品的薄层色谱图中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的紫色斑点。结果表明,样品中可能添加了醋酸泼尼松成分,见图1。

  1.2.2  高效液相色谱法(HPLC)

  1.2.2.1  色谱条件[1]:(1)色谱柱:Agilent SBC-18(250mm×4.6mm,5μm);(2)流动相:甲醇∶水(40∶60);(3)检测波长:240nm;(4)流速:1.0ml/min;室温测定;进样量:20μl。

  1.2.2.2  对照品溶液的制备:精密称取醋酸泼尼松对照品5mg,置50ml量瓶中,加流动相适量,振摇使溶解,再加流动相稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。

  1.2.2.3  供试品溶液的制备:取样品10粒,将内容物倾倒至50ml量瓶中,加流动相适量,超声处理20min,放冷,加流动相至刻度,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液即得。

  1.2.2.4  测定方法:取对照品溶液和供试品溶液各20μl注入高效液相色谱仪中,记录色谱图。

  1.样品;  2.醋酸泼尼松对照品

  图1  薄层色谱图(略)

  2  结果
  
  在供试品色谱图中,出现与对照品色谱保留时间相同的色谱峰,这就进一步确认了样品中含有醋酸泼尼松成分,见图2、3。

  图2  醋酸泼尼松对照品色谱图(略)

  图3  样品色谱图

  2.1  色谱条件:见1.2.2.1项。

  2.2  线性关系实验:精密称取醋酸泼尼松对照品25.02mg至50ml量瓶中,加流动相适量,振摇使溶解,再加流动相至刻度,摇匀,作为储备液。精密吸取储备液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml,分别至10ml容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀。各进样20μl,记录色谱图峰面积。以醋酸泼尼松的进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为A=4.7135×104C+2.3894×104 ,r=0.9998。结果表明醋酸泼尼松在50.04μg至150.12μg范围内与峰面积有良好的线性关系。

  2.3  稳定性实验:取线性实验项下浓度为0.1mg/ml的对照品溶液,室温下分别于0、2、4、6、8h进样测定,结果峰面积基本一致,RSD=0.25%。

  2.4  精密度实验:取同一批样品,照含量测定项下方法对其中的醋酸泼尼松进行测定,重复3次,结果平均含量为0.525mg/粒,RSD=0.42%。

  2.5  回收率测定:取样品内容物粉末1g(约2粒的量)与醋酸泼尼松对照品3.6mg,精密称定,至同一50ml容量瓶中,加流动相适量,超声处理20min,放冷,加流动相稀释至刻度,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液照2.6项下方法测定,结果见表1。

  2.6  样品的含量测定:依照1.2.2项下制备对照品溶液及样品溶液,精密量取对照品溶液及样品溶液各20μl,分别注入高效液相色谱仪中,记录色谱图,按外标法以峰面积计算样品中含醋酸泼尼松的含量。按上述方法,测得此批定喘胶囊每粒含醋酸泼尼松0.525mg。

  表1  回收率测定结果(略)

  平均回收率为98.4%,RSD=0.58%

  3  讨论
   
  由于中药制剂成分复杂,常规检验时干扰较大。通过采用分离能力强、选择性好的薄层色谱法和高效液相色谱法,能够有效检出添加的醋酸泼尼松及添加的量。
   
  目前,某些不法医疗机构为了扩大自配医院制剂的疗效,牟取暴利,不经过临床实验,在自配的医院制剂中擅自非法添加化学药品。如治疗风湿病的制剂中加激素或双氯灭痛,补肾制剂中添加枸橼酸西地那非(伟哥成分),治疗糖尿病制剂中添加格列苯脲等等。患者在不知情的情况下,如果长期大量服用此类医院制剂,将会产生严重的不良反应,轻者造成肝肾功能损坏,重者将会危及生命,本文中的定喘胶囊即是一例。因此,开展这方面的检验工作,建立对非法添加成分检定的方法,可以有效打击某些不法分子制假,坑害人民群众,草菅人命的行为,从而保障广大患者的用药安全。

【参考文献】
  [1]国家药典委员会编.中国药典. 二部[S],2005:845.

作者: 2010-10-5
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