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【摘要】 目的 探讨川芎药材的鉴别方法,完善川芎药材的质量标准。方法 用薄层色谱法鉴别川芎药材；以高效液相色谱法测定阿魏酸的含量。选用Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相为甲醇-1%冰醋酸溶液(21∶79),流速为1.0 mL/min,检测波长为320 nm。结果 薄层色谱中斑点清晰,易于识别。高效液相色谱法精密度、重现性良好；阿魏酸在0.042 5～0.382 5 μg范围内有较好的线性关系,平均回收率为97.10%(RSD＝1.31%)。结论 本法可有效控制川芎药材的质量。
【关键词】 川芎；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准
Study on Quality Standard for Chuanxiong
GAN Ye-mei, ZENG Ling
Guangxi Yulin Pharmaceutical Co.,Ltd, Yulin 537001, China
Abstract：Objective To improve the quality standard for Chuanxiong by studing the method of discriminating Chuanxiong. Methods Chuanxiong was identified by TLC. The content of ferulic acid in Chuanxiong was determine by HPLC. The Agilent Eclipse XDB-C18 (4.6 mm×150 mm, 5 μm) was used, mobile phase was methanol-1% acetic acid solution (21∶79), flow rate was 1.0 mL/min, detection wavelength was 320 nm. Results The TLC spots developed were fairly and simply identical. HPLC was accurate and reproducible. Ferulic acid showed a good liner relationship at range of 0.042 5～0.382 5 μg, the average recovery was 97.10% (RSD＝1.31%). Conclusion These methods can be used to control the quality of Chuanxiong effectively.
Key words：Chuanxiong；TLC；HPLC；quality standard
川芎为常用中药,用于治疗月经不调、经闭痛经、胸胁刺痛、风湿痹痛等。《中华人民共和国药典》先后采用性状、显微、薄层色谱鉴别来控制川芎药材的质量。为了使川芎药材质量控制标准更科学、严谨和更适应现代检验技术,笔者对原标准试作了一些相应改进,完善川芎药材的薄层色谱鉴别方法,同时采用高效液相色谱法测定川芎中阿魏酸的含量,方法简便、准确、重现性好,从而完善和提高了川芎药材的质量标准。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Agilent1100系列高效液相色谱仪,CQX25-06超声波清洗器(上海必能信超声有限公司)。
1.2 试药
川芎药材由广西玉林制药有限责任公司提供,收集自四川、湖南、广西地区,经广西中医学院林安平教授鉴定为Ligusticum chuanxiong Hort.；阿魏酸对照品(供含量测定用,批号0773-9910)、阿魏酸对照品(供鉴别用,批号0773-9001)、川芎对照药材(批号060102)均由中国药品生物制品检定所提供。甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯。
2 薄层色谱鉴别
取本品粉末1 g,加乙醚20 mL,超声提取20 min,滤过,挥干,残渣加乙醇1 mL使溶解,作为供试品溶液[1]。另取川芎对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取上述2种溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正己烷-乙酸乙酯(7∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同的蓝色荧光斑点。
取本品粉末1 g,加稀盐酸15 mL,超声提取20 min,用乙醚(30、20 mL)提取2次,合并乙醚液,滤过,挥干,残渣加乙醇1 mL使溶解,作为供试品溶液[2]。另取阿魏酸对照品适量,加无水乙醇溶解,制成每1 mL含1 mg的对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取上述2种溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(3∶1.5∶0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,再置氨蒸汽中熏数分钟。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同的深蓝色斑点。
3 阿魏酸的含量测定
3.1 色谱条件[2]
Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相：甲醇-1%冰醋酸溶液(21∶79)；流速：1.0 mL/min；检测波长：320 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。理论塔板数按阿魏酸计算应不低于3 500。
3.2 对照品溶液的制备
精密称取阿魏酸对照品适量,加甲醇溶解制成每1 mL含0.042 5 mg的对照品贮备液。再精密吸取该贮备液3.0 mL,置于5 mL棕色容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。
3.3 供试品溶液的制备
取本品适量,研细,称取约0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加入70%甲醇25 mL,密塞,精密称定,加热回流30 min,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,静置,取上清液,用微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。
3.4 对照试验
按照上述色谱条件,吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μL,分别注入色谱仪,进行测定。结果供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,有相同保留时间的色谱峰(见图1)。因此,可在此系统条件下对阿魏酸进行定量分析。
3.5 线性关系考察
精密吸取阿魏酸对照品贮备液(0.042 5 mg/mL)1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL,分别置于10 mL棕色量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,制成一组浓度梯度溶液,摇匀,分别精密吸取10 μL,注入液相色谱仪,记录峰面积。以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为：Y＝－16.4X＋4 916.6,r＝0.999 5,表明阿魏酸在0.042 5～0.382 5 μg范围内呈良好的线性关系。
3.6 精密度试验
精密吸取同一对照品溶液,按上述色谱条件进行分析,重复进样6次,结果峰面积均值为1 243.6,RSD＝0.74%。
3.7 重复性试验
平行制备川芎药材(批号060102)的供试品溶液6份,照“3.1”项下方法进行测定,结果平均含量为0.65 mg/g,RSD＝1.01%。
3.8 稳定性考察
精密吸取供试品溶液10 μL,分别在0、2、4、6 h各进样1次,测定峰面积,RSD＝1.08%。表明供试品溶液在6 h内稳定。
3.9 加样回收率试验
称取已知含量为0.63 mg/g的川芎药材0.3 g,精密称定,分别精密加入阿魏酸对照品贮备液(0.106 3 mg/mL)1.2、1.2、1.8、1.8、2.3、2.3 mL,照“3.3”项下方法制备供试品溶液,依法测定,计算回收率,结果见表1。表1 阿魏酸加样回收率测定结果（略）
3.10 样品测定
按“3.2”和“3.3”项下方法分别制备对照品溶液和供试品溶液,按上述色谱条件,精密吸取10 μL,注入色谱仪,测定,按外标一点法计算,结果见表2。表2 样品测定结果（略）
4 讨论
本实验对川芎药材进行了薄层色谱鉴别,结果与对照药材、对照品斑点一致,且无杂质干扰斑点,效果较好。在川芎对照药材薄层鉴别中,曾比较《中华人民共和国药典》中的提取方法与乙醚直接超声处理,结果斑点差别不大,所以选择了操作简单的直接超声处理。在阿魏酸对照品薄层鉴别中,比较了甲醇超声和稀盐酸超声后用乙醚萃取,结果直接用甲醇超声提取的供试品有斑点干扰。在展开和显色时,曾用《中华人民共和国药典》[1]的展开和显色条件,但考虑到二氯甲烷有毒,显色剂[1%三氯化铁乙醇溶液-1%铁氰化钾溶液(1∶1)的混合溶液]配制繁琐,而且斑点易发散,后经反复尝试,用环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(3∶1.5∶0.2)展开,喷10%磷钼酸乙醇液后置氨蒸汽中熏,阿魏酸斑点特征明显,效果好。
在含量测定中,供试品提取曾比较用甲醇直接超声处理、70%甲醇直接超声处理[1]、酸水提乙醚萃取[3]以及5%Na2CO3先使阿魏酸成钠盐,然后用乙醚脱脂,用盐酸酸化使酸游离,再用乙醚萃取[4],结果后两种方法的杂质峰少,但含量较低；用甲醇直接超处时峰形不对称,所以采用简单而且易操作的70%甲醇直接超声处理。在流动相选择时,曾采用当归原药材[1]含量测定项下的乙腈-0.085%磷酸溶液,结果杂质峰多,峰形宽、不对称。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.89,131.
[2] 张玉爱,吴泽榕,郑起平,等.HPLC测定养血当归软胶囊中阿魏酸的含量[J].中成药,2006,28(4)：599.
[3] 张 健,金 墚,杨传敏,等.HPLC测小儿运脾合剂中川芎酸的含量[J].中国药房,2005,16(24)：1895.
[4] 潘细贵,汪 洋,冯晓东,等.白癜风丸质量标准的研究[J].中国药师, 2006,9(5)：440.