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【摘要】 ：目的 确定乳康胶囊质量标准。方法 通过薄层色谱法对处方中浙贝母、玄参、乳香、天冬进行定性鉴别。运用高效液相色谱-蒸发光散射法对黄芪中的黄芪甲苷进行含量测定。结果 定性鉴别从样品中能检出相应的斑点。黄芪甲苷含量在1.44～4.32 μg之间有良好的线性关系。回收率为100.3%,RSD＝0.5%。结论 所建立的方法可靠,能准确地进行定性、定量检测,可以用于本制剂的质量控制。
【关键词】 乳康胶囊 黄芪甲苷 薄层色谱法 高效液相色谱法
Study on the Quality Control of Rukang Capsule
WANG Jian-ming, WANG Yan-song, MA Xiao-xing, et al
Institute of Chinese Medicine, Heilongjiang University of TCM, Harbin 150040, China
Abstract：Objective To formulate the quality standard of Rukang Capsule. Method The TLC of Zhebeimu, Xuanshen, Ruxiang and Tiandong were done separately. The HPLC-ELSD was used to determine the content of Astragaloside in Mongolian Milkretch Root. Result There were the same spots between the controls and samples and an excellent linear relationship for 1.44～4.32 μg to the content determination of Astragaloside. The average recovery can reach 100.3% with 0.5% of RSD. Conclusion This method is reliable and accurate to application, and can be used for the quality control of the preperation.
Key words：Rukang Capsule；Astragaloside；TLC；HPLC
乳康胶囊是原乳康片剂的改革剂型,由黄芪、丹参、莪术、天冬、浙贝母、乳香、没药、牡蛎、海藻、夏枯草、三棱、玄参、鸡内金(炒)、白术、瓜蒌15味中药制成,具有舒肝解郁、理气止痛、活血破瘀、软坚散结、补气健脾之功效,用于乳腺增生病的治疗。
为提高该制剂的质量标准,我们采用薄层色谱法对乳康胶囊中浙贝母、玄参、乳香和天冬进行了定性鉴别,并且对黄芪甲苷进行了含量测定。据报道,黄芪甲苷的含量测定方法有薄层扫描法[1]、HPLC-UV法[2]、HPLC-ELSD法[3]、比色法[4]等,由于黄芪甲苷仅在200 nm左右有弱的末端吸收,因此,操作条件须十分严格。蒸发光散射检测是使流动相溶液喷雾汽化,进入加热管后溶剂挥发,而不受流动相溶剂的干扰,不要求被测组分有特定的化学结构,适用于不挥发性成分的检测。本研究采用HPLC-ELSD法对黄芪甲苷进行含量测定,灵敏度高,分离度好,干扰少,重现性好,是检测黄芪甲苷的新型有效的方法。
1 仪器和试药
Waters 600E型高效液相色谱仪,Alltech ELSD 2000蒸发光散射检测器,Millennium 32色谱工作站数据处理系统,均为美国产。黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(供含量测定用,批号0781-20020)；浙贝母对照药材(薄层鉴别用,批号0972-9903)；玄参对照药材(薄层鉴别用,批号1072-200002)；乳香对照药材(薄层鉴别用,批号0970-9402)；天冬对照药材(薄层鉴别用,批号1139-200001)；乳康胶囊为中试样品(批号050501、050502、050503)。乙腈为色谱纯,水为二次重蒸水,其余试剂均为分析纯。
2 定性鉴别
2.1 浙贝母[5]
取本品内容物7 g,加甲醇30 mL回流提取1 h,滤过,滤液蒸干,残渣加0.1 mol/L盐酸溶液20 mL使溶解,滤过,滤液加浓氨试液调pH 9～10,用氯仿提取2次(30、30 mL),合并氯仿液,蒸干,残渣加氯仿0.5 mL使溶解,作为供试品溶液。取浙贝母对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。另取缺浙贝母阴性样品5 g,同法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取上述溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以苯-丙酮(1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷稀碘化铋钾试液。供试品色谱中,在与浙贝母对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
2.2 玄参[6]
取本品内容物5 g,加水饱和的正丁醇40 mL,超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2 mL使溶解,作为供试品溶液。取玄参对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。另取缺玄参阴性样品5 g,同法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取上述溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇(5∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%香草醛硫酸溶液,于105 ℃加热至斑点显色清晰,日光下检视。供试品色谱中,在与玄参对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
2.3 乳香[7]
取本品内容物7 g,置具塞锥形瓶中,加乙醇20 mL,超声处理1 h,滤过,滤液挥至5 mL,作为供试品溶液。取乳香对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。另取缺乳香阴性样品5 g,同法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取上述溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以苯-乙酸乙酯(19∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105 ℃加热至斑点显色清晰,日光下检视。供试品色谱中,在与乳香对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
2.4 天冬[8]
取本品内容物5 g,加水20 mL,加热溶解,滤过,滤液加7%盐酸10 mL,置水浴上浓缩至干,加氯仿20 mL,滤去不溶物,转移至分液漏斗中,加水20 mL,振摇提取,分取氯仿层,浓缩至约1 mL,作为供试品溶液。取天冬对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。另取β-谷甾醇适量,加乙醇制成1 mL含0.5 mg的溶液,作为对照品溶液。再取缺天冬阴性样品5 g,同法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取上述溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(12∶4∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,于105 ℃加热至斑点显色清晰,日光下检视。供试品色谱中,在与天冬对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
3 乳康胶囊中黄芪甲苷的含量测定
本法采用高效液相色谱法分离出黄芪甲苷,以蒸发光散射检测器检测,外标两点法计算含量。
3.1 色谱条件及系统适用性试验
色谱柱：Kromasil C18柱(4.6 mm×200 mm,5 μm),填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶。流动相：乙腈-水(32∶68)；柱温：40 ℃；流速：1.0 mL/min；高纯氮气体流速：2.5 L/min；漂移管温度：105 ℃；理论塔板数：按黄芪甲苷计算不低于2 000。见图1。
3.2 线性范围及标准曲线制备
精密称取黄芪甲苷对照品3.6 mg,置10 mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。分别精密吸取对照品溶液4、6、8、10、12 μL,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件进行测定,记录色谱图。以峰面积的自然对数为纵坐标,以黄芪甲苷含量的自然对数为横坐标,绘制标准曲线,得黄芪甲苷的回归方程为：lnA＝10.960 3＋1.885 2 lnX(r＝0.999 9),表明黄芪甲苷在1.44～4.32 μg之间具有良好的线性关系。
3.3 供试品溶液的制备
取本品约4 g,精密称定,置索氏提取器中,加乙醚50 mL回流提取3 h,弃去乙醚提取液,药渣及滤纸筒挥去乙醚,加甲醇60 mL,回流提取8 h,至提取液近无色,将甲醇提取液蒸干,残渣加水20 mL,微热使溶解,用水饱和的正丁醇提取5次(30、20、20、20、20 mL),合并正丁醇层,用氨试液洗2次,每次30 mL,弃去氨试液,正丁醇层用正丁醇饱和的水20 mL洗1次,分取正丁醇层,蒸干,残渣加甲醇溶解并定容于5 mL容量瓶中,摇匀,即得。
3.4 空白试验
按供试品溶液的制备方法制成空白对照液,依法进行测定,结果空白溶液在黄芪甲苷保留时间处无色谱峰,表明在实验条件下,其它成分对测定无干扰。
3.5 精密度试验
精密吸取同一批对照品溶液10 μL,按含量测定项下色谱条件测定,连续进样5次,黄芪甲苷对照品峰面积积分值RSD＝0.4%,说明精密度较高,测定可靠。
3.6 稳定性试验
精密称取样品4.000 3 g,按供试品制备方法制备供试品溶液,分别在0、2、4、8、12 h,每次精密进样15 μL进行测定,结果RSD＝0.2%,说明样品中所测定成分在12 h内是稳定的。
3.7 重复性试验
精密称取同一批号(050501)样品4 g,取5份,精密称定,按含量测定项下制备供试品溶液和测定,结果表明,本方法重复性好,RSD＝0.3%。
3.8 回收率试验
取本品(批号050501)5份,每份约2 g,精密称定,分别加入黄芪甲苷对照品0.576 mg,混匀后,分别按上述条件测定,结果5份样品平均回收率为100.3%,RSD＝0.5%,表明回收率较高,方法可靠。
3.9 含量测定
取本品3批,按上述色谱条件测定,结果见表1。表1 含量测定结果（略）
结果表明,黄芪甲苷的平均含量为0.284 3 mg/g。以每粒胶囊重0.26 g计算,则每粒乳康胶囊中平均含黄芪甲苷量为0.074 mg。
4 讨论
经过反复试验,对浙贝母、玄参、乳香和天冬进行了成功的薄层鉴别,具有专一性和可重复性,能有效地对该制剂进行定性鉴别,可用于制剂的质量控制。在流动相的选择过程中,试验了甲醇-水(75∶25)、甲醇-水-冰醋酸(75∶25∶1、76∶24∶0.5)、乙腈-水(38∶62、32∶68)等不同流动相,结果表明,采用乙腈-水(32∶68)为流动相时,分离情况良好。根据文献报道及在实验中观察基线噪音和信噪比,确定气体流速2.5 L/min、漂移管温度105 ℃为最佳试验条件。
【参考文献】
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