RP-HPLC法测定复方氧氟沙星栓剂中氧氟沙星和甲硝唑的含量

摘　要　
目的：建立反相高效液相色谱法，测定复方氧氟沙星栓剂中氧氟沙星和甲硝唑的含量。
方法：采用ODS-C₁₈(4.6×250mm)5μm不锈钢柱，以盐酸雷尼替丁为内标物，甲醇∶水∶磷酸∶三乙胺(30∶70∶0.39∶0.70;pH=3.15)为流动相，检测波长275nm。
结果：氧氟沙星在3.0～26.0μg^.ml^-1范围内线性关系良好，r=0.999 9(n=5),平均回收率为98.82%,RSD=0.78%;甲硝唑在3.0～26.0μg^.ml^-1范围内线性关系良好，r=0.999 8(n=5),平均回收率为98.87%,RSD=2.29%。日内和日间精密度的RSD均小于3%(n=4)。
结论：本法简便，准确，快速。

Determination of Ofloxacin and Metronidazole in Compoud of Ofloxacin Suppository by RP-HPLC

LB Jin-Sheng,LIU Zhen-Dong,FU Ruo-Qiu
（Research of Field Surgery,Daping Hospital Third Military Medical University,Chongqing　400042）

ABSTRACT　Aim RP-HPLC was used to determine the content of ofloxacin and metronidazole in compound of ofloxacin suppository.Method The RP-HPLC system consisted of ODS C₁₈ column(4.6mm×250mm,5μm),methanol-water-phosphoric acid-triethylamine(30∶70∶0.39∶0.70;pH=3.15)mixture as mobile phase,with detection at 275nm,flow rate 0.6ml/min and column temperature at room temperature.Results Ofloxacin had a good linearity between 3.0μg^.ml^-1 to 26.0μg^.ml^-1,the regression equation was Co=2.0271Xo+0.4880，r=0.999 9(n=5)；the average recovery was 98.82%，RSD=0.78%.Metronidazole had a good linearity between 3.0μg^.ml^-1 to 26.0μg^.ml^-1,the regression equation was C_M=5.1506X_M+0.0312，r_M　=0.999 8(n=5)；the average recovery was 98.87%，RSD=2.29%.The precisions of the same day and the different day were all ideal,RSD＜3%.Conclusion This method was simple,accurate and fast.
KEY WORDS　Ofloxacin；Metronidazole；Compound of ofloxacin suppository；HPLC

　　复方氧氟沙星栓剂为我院自制制剂，含有氧氟沙星、甲硝唑等成分，临床主要用于治疗滴虫性及细菌性阴道炎，疗效显著。由于氧氟沙星和甲硝唑紫外吸收光谱重叠，采用普通紫外吸收分光度法测定较为复杂。本文建立RP-HPLC法同时精确测定这两种成分，为本栓剂提供了含量测定方法。

1　仪器与试药

　　System gold高效液相色谱仪、125双流泵、166可变波长紫外检测器、System gold数据处理机(均为美国贝克曼公司)。LG10-2.4A型离心机(北京医用离心机厂)；Barnstead D7033型纯水仪(美国出品)。
　　氧氟沙星(浙江新昌制药厂，批号 970118)；甲硝唑(湖北沙市第三制药厂，批号 961002)；盐酸雷尼替丁(内标，中国药品生物制品鉴定所)；复方氧氟沙星栓剂(本院制剂室，批号 991201、991204、991208)。水为纯水仪所制纯水，其他试剂均为分析纯。

2　实验方法与结果

2.1　处方　氧氟沙星30g，甲硝唑30g,硼酸50g,冰片0.4g,明胶40g,聚乙二醇52g,吐温-80 3.7g,蒸馏水46.7g,甘油82.7g,制成重3.36g栓剂100枚。
2.2　色谱条件　色谱柱：ODS-C₁₈(4.6×250mm)5μm不锈钢柱；流动相：甲醇-水-磷酸-三乙胺(30∶70∶0.39∶0.7)；流速0.6ml/min；检测波长275nm。
2.3　标准曲线　精密称取经105℃干燥至恒重的氧氟沙星约0.15g,甲硝唑约0.15g，共置于100ml量瓶中，0.1mol^.L^-1盐酸溶解并定容，摇匀，作为混合物储备液。另取经105℃干燥至恒重的盐酸雷尼替丁15.6mg，精密称定，置于100ml量瓶中，0.1mol^.L^-1盐酸溶解并定容，摇匀，作为内标储备液。精密量取混合物储备液0.05、0.10、0.20、0.30、0.40ml，分别置于25ml量瓶中，各加内标储备液1ml，流动相稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件，取20μl进样测定(n=3)。色谱图见图1。
　　以被测组分浓度C为纵坐标，被测组分与内标峰面积之比X为横坐标，进行线性回归，得氧氟沙星(3.0～26.0μg^.ml^-1)和甲硝唑(3.0～26.0μg^.ml^-1)
的回归方程依次为：
　　C_o=2.027 1X_o+0.488 0，r_o =0.999 9 n=5

图1　对照品的高效液相色谱图
1 盐酸雷尼替丁(内标)　2 甲硝唑　3 氧氟沙星

　　C_m=3.500 5X_m+0.031 2，r_m =0.999 8 n=5
2.4　空白试验　按处方比例制备空白基质适量，取约0.94g，置于100ml量瓶中，0.1mol^.L^-1盐酸加热溶解并定容，摇匀，滤过。弃去粗滤液，取续滤液作为空白基质储备液。用移液管小心移取1ml空白基质储备液于25ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀。取20μl进样测定，结果表明，基质峰不影响样品成分测定。
2.5　回收率试验　精密量取氧氟沙星和甲硝唑混合物储备液适量，加入处方量的基质储备液，用流动相配制成标准曲线浓度范围内的系列浓度溶液5份。按标准曲线项下方法测定，计算平均回收率，结果见表1。

表1　氧氟沙星与甲硝唑的回收率测定结果

样品号

氧氟沙星

甲硝唑

加入量(μg)

测得量(μg)

回收率(%)

±s(%)

RSD(%)

加入量(μg)

测得量(μg)

回收率(%)

±s(%)

RSD(%)

1

3.045

2.972

97.59

3.146

3.045

96.80

2

6.090

6.055

99.43

6.292

6.061

96.33

3

12.180

12.120

99.51

98.82±0.77

0.78

12.584

12.799

101.71

98.87±2.26

2.29

4

18.270

18.067

98.89

18.876

18.774

99.46

5

24.360

24.041

98.69

25.168

25.176

100.03

2.6　精密度试验　取3个浓度的样品日内、日间反复进样，计算日内、日间偏差，结果见表2。

表2　精密度测定结果(±s，n=4)

组　分

日　内

日　间

测得量(μg)

RSD(%)

测得量(μg)

RSD(%)

氧氟沙星

3.020±0.068

2.25

3.060±0.072

2.35

12.121±0.200

1.65

12.162±0.182

1.50

24.530±0.195

0.80

24.451±0.212

0.87

甲硝唑

3.169±0.084

2.65

3.125±0.068

2.18

12.799±0.368

2.88

12.376±0.370

2.99

25.176±0.373

1.48

25.236±0.382

1.51

2.7　样品测定　分别精密称取不同批号的5批复方氧氟沙星栓剂1.0g，置于100ml量瓶中，以0.1mol^.L^-1盐酸加热溶解并定容，摇匀。按空白试验和标准曲线项下方法进行含量测定，计算平均标示量，结果见表3。

表3　复方氧氟沙星栓剂含量测定结果

样品批号

氧氟沙星

甲硝唑

含量(%)

RSD(%)

含量(%)

RSD(%)

991201

99.25

1.02

101.20

1.38

991204

98.42

2.05

100.66

2.99

991208

99.78

0.92

98.78

1.56

3　讨　论

3.1　由于氧氟沙星和甲硝唑均为含氮药物，在十八烷基键合硅胶柱上，与硅胶载体上未反应硅烷醇相作用，导致峰扩张，形成拖尾。这一现象在喹诺酮类抗菌药中以氧氟沙星最为突出。本文在流动相中加入胺改性剂，憎水的胺优先被吸附在硅胶载体未反应的硅烷醇上，使氧氟沙星和甲硝唑的拖尾现象减少，从而提高了测定的选择性和准确度。但如果三乙胺的浓度太高，则造成基线不稳并使氧氟沙星、甲硝唑的保留时间延长。经本实验摸索，采用RP-HPLC法测定该栓剂，宜选用0.7%(0.05mol^.L^-1)的三乙胺浓度。
3.2　流动相的pH值对氧氟沙星出峰时间影响较大，当本流动相pH=4.3时，直到36min，氧氟沙星仍未出峰。本实验研究表明调节流动相使pH=3.1左右，则能明显缩短出峰时间。

(本文编辑　梁爱君)

吕金胜,男,1953年11月生.高级实验师.
吕金胜（中国人民解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所　药剂科　重庆　400042）
刘震东（中国人民解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所　药剂科　重庆　400042）
傅若秋（中国人民解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所　药剂科　重庆　400042）

参考文献

［1］　张守尧,吴朝晖,张忠义,等.博泰软膏中三组分的HPLC测定［J］.中国医药工业杂志,1998;29(7):315
［2］　汤毅,邹恒琴,古维新,等.氧氟沙星软膏的HPLC法测定［J］.现代应用药学,1996;13(5):62
［3］　雷嘉川，任芷萍，颜玉莲,等.替硝唑凝胶剂的研制与质量控制［J］.中国药房,1998;9(2):66

(2000-01-11收稿　2000-01-31修回)