高效液相色谱法测定葡萄糖和甘露醇

1　引　　言

　　葡萄糖和甘露醇性质相似，在医药和食品工业中，均有着重要用途，随着医药工业的发展，两种物质在药品中常常同时存在，故需同时准确测定两种物质的含量，传统测定其中一种物质，表征其浓度通常有两种方法，一种是比旋度法，另一种是菲林试液络合滴定法，但由于比旋度法易受其它物质干扰，而且葡萄糖和甘露醇均具有旋光性，两者又均能与菲林试液反应，因此不能得出葡萄糖和甘露醇的绝对含量，故上述两种方法不能同时表征其浓度，采用高效液相色谱法（HPLC）能够简单、快速准确测定其含量。因此，国外应用较多，本文提出以水为流动相，以磺化聚苯乙烯类凝胶为填充剂；D-山梨醇为内标，获得良好的分离效果，测定了输血用红细胞保存液（MAP液）样品中葡萄糖和甘露醇的含量。本法可用于医药行业产品中，葡萄糖和甘露醇同时存在时的质量控制。

2　实验部分

2.1　仪器与试剂　日本分光TRI ROTAR-Ⅲ高效液相色谱仪，配RI-930型示差折光检测器；TRI ROTAR-Ⅲ 泵；851-AS型智能取样器；PC-9801ns/T型笔记本电脑（安装805数据站）。水：重蒸水；葡萄糖（分析纯）；甘露醇（分析纯）；D-山梨醇（分析纯）；输血用红细胞保存液（MAP液）。
2.2　色谱条件　色谱柱：磺化聚苯乙烯类凝胶填充柱（shodex packed column） （日本分光，3.9 mm.id×30 cm）柱温：60℃，流动相：水，流速：0.6 mL/min，进样量：20 μL，检测器温度：室温。
2.3　内标溶液的配制　取D-山梨醇约1.25g，置25　mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4　标准液的配制　取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品约 0.721 g，甘露醇对照品约1.457 g，精密称定，置100 mL容量瓶中，加双蒸水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶液10 mL与内标溶液2.0 mL置25 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。用0.45 μm滤膜过滤，取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。
2.5　样品处理　取红细胞保存液10 mL与内标溶液2.0 mL置25 mL容量瓶中，加双蒸水稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。

3　结果与讨论

3.1　精密度实验　用上述方法处理同一份样品（同上），按以上选定的条件平行操作6次，根据测定结果求得葡萄糖、甘露醇的标准偏差和相对标准偏差分别为：葡萄糖0.00253和0.37%；甘露醇0.00417和0.28%。
3.2　方法的线性关系和检测限　用上述配制标准液方法分别配制混合液系列，葡萄糖和甘露醇浓度分别为3、6、9、12、15、18 g/L，按以上色谱条件，分别以葡萄糖和甘露醇组份峰面积与内标峰面积比值X为横坐标，浓度比值Y为纵坐标，求出葡萄糖和甘露醇的回归方程、相关系数：葡萄糖Y=0.9029X+0.0445，r=0.9994、甘露醇Y=0.9123X+0.0418，r=0.9994其中葡萄糖的检出限为0.25　μg、甘露醇的检出限为0.24　μg。
3．3　方法的回收率　对已知含量的样品添加一定量的葡萄糖、甘露醇标准，计算回收率，结果葡萄糖平均为97.1%，甘露醇平均为96.4%。

4　结　　论

　　从谱图和实验数据可以看出，本文提出的测定方法得到了很好的结果，目前，应用HPLC测定糖的文献报道中，大部分使用氨基键合柱，氨基-氨基键合柱等，流动相通常是不同比例的乙腈-水体系，本法提出使用以磺化聚苯乙烯类凝胶为填充剂的填充柱，水为流动相，这样一方面降低了分析费用，另一方面提高了实验的安全性。

董晓东（长春泰尔茂医用器具有限公司化验室，长春 130012）
候宛玲（长春泰尔茂医用器具有限公司化验室，长春 130012）
苏绍哲（长春泰尔茂医用器具有限公司化验室，长春 130012）
张玉彬（长春泰尔茂医用器具有限公司化验室，长春 130012）