离子对高效液相色谱法测定注射用美洛西林钠—舒巴坦钠含量

　　摘要　
目的：建立反相离子对高效液相色谱法测定注射用美洛西林钠-舒巴坦钠含量。
方法：采用μ Bondapak C₁₈色谱柱，0.005 mol^.L^-1氢氧化四丁基铵-乙腈(68∶32，pH 5.0±0.1)为流动相，230 nm为检测波长，30 ℃柱温下对美洛西林和舒巴坦进行分离和测定。
结果：能同时测定制剂中美洛西林和舒巴坦的含量。美洛西林在0.25～1.5 mg^.mL^-1，舒巴坦在0.125～0.75 mg^.mL^-1范围内，峰面积与其浓度呈良好线性关系(r=0.9999)；平均回收率(n=5)美洛西林为99.76 %(RSD=0.92 %)，舒巴坦为99.66 %(RSD=0.85 %)。
结论：该法简便、快速、准确，适用于该药品生产及临床应用中的质量监控。
　　关键词　美洛西林　舒巴坦　离子对高效液相色谱法
美洛西林钠(Mezlocillin Sodium)是近年研制的一种广谱半合成青霉素，为氨苄青霉素的衍生物。体外试验表明其对细菌所产生的β-内酰胺酶不稳定^［1］。舒巴坦钠(Sulbactam Sodium)是一种竞争性不可逆的β-内酰胺酶抑制剂，其本身对细菌的抑制作用较弱，但当它与美洛西林钠等β-内酰胺类抗生素合用后，能增强其抵抗多种β-内酰胺酶降解的能力，获得良好的协同作用。注射用美洛西林钠-舒巴坦钠就是依据上述思路研制的一种国产新药。本文参考国内外有关资料对该制剂中单一成分的测定方法^［2，3］，建立了反相离子对高效液相色谱法，该法简便、快速、准确，能同时测定制剂中美洛西林和舒巴坦的含量，适用于该药品生产及临床应用中的质量监控。

Determination of Content of Mezlocillin Sodium－Sulbactam Sodium for Injection by Ion Pair High Performance Liquid Chromatography

Zhang Dan and Zeng Jingze
(Pharmacy School of West China University of Medical Sciences,Chengdu　610041)

　　Abstract　Objective：To establish a method using reversed－phase ion pair high performance liquid chromatography,for determining the content of mezlocillin sodium－sulbactam sodium for injection.Methods:Mezlocillin and sulbactam were separated and determinated on LC－3A HPLC instrument used a μ Bondapak C₁₈ column(25 cm×4.6 mm,10 μm),the mobile phase consisted of 0.005 mol^.L^-1 tetrabutylammonium hydroxide－acetonitrile(68∶32,pH 5.0±0.1)and the flow rate was 0.8 mL^.min^-1.The column temperature was 30 ℃ and the UV detection wavelength was 230 nm.Results:It can simultaneously determine the content of mezlocillin and sulbactam in the drug preparation.The calibration curves were linear in the range of 0.25～1.5 mg^.mL^-1 for mezlocillin(r=0.9999)and 0.125～0.75 mg^.mL^-1 for sulbactam(r=0.9999).The average recoveries(n=5)of mezlocillin and sulbactam were 99.76 %(RSD=0.92 %)and 99.66 %(RSD=0.85 %),respectively.Conclusion:This method is simple,quick and accurate and is very suitable for the quality control the drug preparation factory and clinical application.
　　Key words　mezlocillin,sulbactam,ion pair high performance liquid chromatography

1　仪器与色谱条件
日本岛津LC-3A型高效液相色谱仪，附有CTD-2A型柱恒温箱，SPD-1型紫外检测器，C-R1A型色谱数据处理机。
色谱柱：μ Bondapak C₁₈柱(250 mm×4.6 mm,10 μm);流动相：0.005 mol^.L^-1氢氧化四丁基铵溶液(0.1 mol^.L^-1磷酸调pH至5.0±0.1)-乙腈(68∶32)；流速：0.8 mL^.min^-1；检测波长：230 nm;柱温：30℃。
2　药品及试剂
美洛西林钠对照品：山东沂蒙新华制药厂提供，批号　970128，纯度为96.20 %；舒巴坦对照品：中国药品生物制品检定所提供；注射用美洛西林钠-舒巴坦钠：海南三洋药业有限公司生产，批号　970901，970902，970903。实验用水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
3　线性范围
精密称取美洛西林钠对照品和舒巴坦对照品适量，用水溶解并稀释成含美洛西林为2000 μg^.mL^-1、含舒巴坦为1000 μg^.mL^-1的对照品溶液；立即精密量取该溶液适量，用水配制成含美洛西林分别为250、500、750、1000、1250及1500 μg^.mL^-1和含舒巴坦分别为125、250、375、500、625及750 μg^.mL^-1的标准溶液，分别进样20 μL，按色谱条件测定。以各药物峰面积(Y)对标准溶液浓度(X)进行线性回归，得美洛西林、舒巴坦回归方程分别为：
Y=3326+634X　r=0.9999
Y=-62+210X　r=0.9999
4　回收试验
配制一定浓度的样品溶液，加入不同量的美洛西林钠和舒巴坦对照品，依法进行回收试验，结果见表1、2。

表1　美洛西林回收试验结果(n=5)

试液浓度
/μg^.mL^-1

加入量
/μg^.mL^-1

回收率
/%

RSD
/%

584

250

99.80

1.0

584

375

99.37

0.96

584

500

100.1

0.77

表2　舒巴坦回收试验结果(n=5)

试液浓度
/μg^.mL^-1

加入量
/μg^.mL^-1

回收率
/%

RSD
/%

278

125

99.75

0.98

278

188

100.0

0.95

278

250

99.24

0.63

5　精密度试验

　　对同一美洛西林钠对照品溶液(1250 μg^.mL^-1)20 μL连续进样5次，测得峰面积值的RSD为0.42 %；对同一舒巴坦对照品溶液(625 μg^.mL^-1)20 μL连续进样5次，测得峰面积值的RSD为0.77 %。
6　样品测定
取样品约35 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取20 μL，注入色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，同时用美洛西林钠及舒巴坦对照品溶液，同法测定作对照，计算样品中美洛西林(C₂₁H₂₅N₅O₈S₂)和舒巴坦(C₈H₁₁NO₅S)的含量，结果见表3。色谱图见图1。

表3　样品含量测定结果

批号

含量/μg^.mg^-1
(按无水物计)

标示量的百分含量/%
(按平均装量计)

美洛西林

舒巴坦

洛美西林

舒巴坦

970901

659

309

107.3

100.6

970902

661

310

107.8

101.1

970903

662

312

107.7

101.5

图1　高效液相色谱图
A.对照品　B.样品
1.舒巴坦(7.08 min)　2.美洛西林(15.73 min)

7　讨论
7.1　由于舒巴坦在普通反相流动相系统(如甲醇-水)中保留时间较短(t_R≈5 min)，与溶剂峰重合，测定误差较大，经调整流动相比例仍无改善，故在流动相中采用离子对试剂—氢氧化四丁基铵。在弱酸性(pH 5.0±0.1)介质中，游离的舒巴坦可与之形成极性较小的离子对络合物，使舒巴坦的保留时间t_R增至约7 min，从而避开溶剂峰干扰，提高了测定的准确性。
7.2　据报道^［1］，美洛西林在pH 4.0以下效价下降较快，在pH 4.5以下会产生沉淀。故本实验用0.1 mol^.L^-1磷酸调节0.005 mol^.L^-1氢氧化四丁基铵水溶液为pH 5.0±0.1，这样既可准确测定美洛西林，又不影响舒巴坦-四丁基铵离子对络合物的形成。
7.3　本品供试液均用水溶液配制。经实验，该水溶液不稳定，溶液在冰箱(4 ℃)放置过夜，含量显著下降。其中美洛西林含量降低约30 %，舒巴坦含量降低约38 %。故应当日临用前新配供试液，不得放置过夜。

作者单位：张　丹　曾经泽　华西医科大学药学院　成都　610041
本文于1998年2月17日收到

参考文献
1　张维民.国内新药文献指南.第一分册(西药部分).北京：中医古籍出版社，1995.297
2　美国药典.Ⅹ　Ⅹ　Ⅲ.1994.专题1024
3　中华人民共和国卫生部部标准(试行).WS-131(X-108)-93