蒸发光散射检测器简化了药物HPLC分析的应用

　　在药品质控、研究、临床应用及生产中，均要对药物的质量进行分析评估。HPLC法是常用的分析方法之一。在其分析检测时，鉴于有些药物缺少适宜的光化学结构，因此不能用常用的光学检测器如紫外、荧光等检测，红外检测器灵敏度较低，不适用于梯度洗脱时应用；质谱检测器，其价格过高，又限制了它的应用；而蒸发光散射检测器(ELSD)则是理想的选择。
ELSD能克服上述检测器中提到的不足，它是适用型检测器，其响应值与样品的质量成正比关系，而与有无光吸收无关，同时流动相在检测前已蒸发，因此在梯度洗脱中EISD的基线是稳定的。
本文主要介绍应用ELSD检测药物的实例，由此可见其优越性。

1　仪器及试剂
Alltech 525二元泵；570自动进样器，Rheadyne,7725i进样阀，蒸发光散射检测器，PE Turbo chrom数据处理软件或HP化学工作站。
溶剂，色谱纯，购自Burdich and jachson公司。
银杏内酯、抗生素及抗凝剂标准品购自Sigma公司，银杏苦内酯由Eneymatic Therapy公司提供，维库溴铵(万可松)、罗库溴铵(爱可松)荷兰，哌库溴铵(阿端)匈牙利，泮库溴铵(潘可龙)意大利。

2　结果与讨论
HPLC的折光检测器，是通用型检测器，但其灵敏度低，且不适于梯度洗脱中应用，同时其随温度的变化而引起基线不稳，此外，最初出来的大溶剂峰，有可能与较早洗脱出的组分峰相重叠。而蒸发光散射检测器，由于流动相在检测前即已蒸发，因此提高了其基线的不稳定性，也提高了灵敏度。
荧光检测器是非常灵敏的检测器，但仅限于有荧光的化合物检测，或经衍生化产生荧光后才能检测。ELSD检测器则直接检测。图1是蒸发光散射检测器检测的两组抗生素HPLC图谱。其中，大环内酯类抗生素的检测条件为：柱：Macrosphere^TM300 C4，250 mm×4.6 mm，7 μm；流动相：Acetonitrile:0.2 mol^.L^-1 Ammonium Acetate in Water,pH 4.5(95∶5)；流速：1.0 mL^.min^-1；检测器：500 ELSD。氨基糖类抗生素的检测条件为：柱：Alltima^TM C₁₈，150 mm×4.6 mm，5 μm；流动相：A:0.2% Pentafluoropropionic Acid　B：Methanol；梯度：Time：　0　10，%B：　45　65；流速：1.0 mL^.min^-1；检测器：500 ELSD with LTA^TM。传统的检测方法是要经柱前^［2］或柱后^［3，4］衍生化后用荧光检测器检测的。　　

图1　HPLC图谱
A.大环内酯类抗菌素　B.氨基糖苷类抗生素
1.红霉素　2.链霉素　3.托布霉素　4.阿米卡星　5.新霉素

　　紫外检测器主要缺点是对没有紫外吸收的化合物不适用，如其一定用此检测，也需经衍生化。而用ELSD检测器，而可直接将其检测，图2是两种无紫外吸收的植物药成分的ELSD检测图谱。其中银杏内酯的检测条件为：柱：Nucleosil C₁₈，250 mm×2.1 mm，5 μm；流动相：Water:Methanol:Tetrahydrofuran(70∶20∶10)；流速：0.2 mL^.min^-1；检测器：500 ELSD。
人参皂苷的检测条件为：柱：Partisil ODS^，250 mm×4.6 mm，5 μm；流动相：A:Water　B:Acetonitrile；梯度：Time：0　30，%B：　20　60；流速：0.8 mL^.min^-1；检测器：500ELSD。

图2　HPLC图谱
A.银杏内酯　B.人参皂苷
1.J　2.C　3.A　4.B　5.Rg₁　6.RB₁

　　对只有紫外未吸收的化合物，则用紫外检测时往往灵敏度低，基线易漂移，如采用梯度洗脱则会受到溶剂干扰，图3是用ELSD等UV(205 nm)两种方法检则肌肉松弛剂的比较HPLC图谱，检测条件为：柱：Adsorbosphere UHS C₁₈，150 mm×2.1 mm，5 μm；流动相：A:0.1% TFA in Water　B：0.1% TFA in Methanol；梯度：Time：　0　2　12　15，%B：　35　35　57　57；流速：0.2 mL^.min^-1。由于ELSD的检测前，流动相已蒸发，结果基线稳定。
用紫外检测器，检测未知成分时，由于不了解吸收与质量之间具体关系，因此对此类成分，ELSD能反映也响应与质量之间关系。如图4所示，分别用紫外检测(220 nm)与ELSD/LTA检测，4种抗惊厥药(0.25 mg^.mL^-1)的HPLC图谱，检测条件为：柱：Platinum EPS C₁₈，150mm×4.6mm，5μm；流动相：A:0.025mol^.L^-1 Ammonium Acetate,pH 5.5∶Acetonitrile(70∶30)；流速：1.5 mL^.min^-1。由于各化合物摩尔吸光系数不同，其在紫外220 nm波长处的响应值也不同，而ELSD/LTA检测此4个化合物的响应值几乎一样，因此能反应其实际质量。

图3　肌肉松弛药HPLC图谱
1.枸橼酸，磷酸钠，醋酸钠，甘露糖醇　2.罗库溴铵
3.泮库溴铵(巴夫龙)　4.哌库溴铵　5.维库溴铵

图4　抗惊厥药HPLC图谱
1.乙基苯妥英　2.3-甲基苯乙妥因　3.3-甲-5-苯-5-乙基妥因　4.苯妥因　5.氨甲酰氮

3　结论
随着医药工业的发展及竞争加剧，对药物成分、代谢产生、降解物与杂质的定性、定量提出了更高的要求，ELSD的应用，则使复杂的药物分析变得简单化了，而且能符合标准的要求。
(参考文献略)

田 洁供稿