高效液相色谱法测定复方鱼腥草颗粒中黄芩苷的含量

　　复方鱼腥草颗粒系依据《卫生部药品标准》中药成方制剂第七册收载的复方鱼腹草片的改型制剂，处方由鱼腥草、黄芩、板蓝根、金银花、连翘5味中药组成，具有清热解毒之功效。方中黄芩的主要有效成分为黄芩苷等^［1］，现代药理研究表明，黄芩苷有抗菌、抗炎、抗变态反应作用^［2］，是复方鱼腥草颗粒中的主要有效成分之一，故选用黄芩中化学成分黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)的含量作为复方鱼腥草颗粒质量控制的一个方面进行研究。有关黄芩苷的含量测定，报道的方法很多，有HPLC^［3］、分光光度法^［4］、聚酰胺薄膜层析法^［5］等。本文采用高效液相色谱法对本品进行黄芩苷的含量测定。实验结果表明，本文条件能消除杂质的干扰，方法简单易行，经9次回收试验，其平均回收率为99.27%。

1　仪器与试药
Waters 515泵、PDA 996二极管阵列检测器、2010色谱工作站；Sartorius BP211D电子天平。
甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
黄芩苷对照品(由中国药品生物制品检定所提供)；复方鱼腥草颗粒(广西半宙制药集团公司第三制药厂)。

2　实验方法与结果
2.1　色谱条件　
色谱柱：μ Bondapak C₁₈， 250 mm×4.6 mm，10 μm；流动相：甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)；检测波长：280 nm；流速：1.0 mL^.min^-1。
2.2　溶液的配制　
黄芩苷对照品溶液：精密称取在60 ℃真空干燥4 h的黄芩苷对照品30 mg，加适量甲醇溶解，加甲醇稀释至100 mL，作为储备液，精确量取5 mL，至50 mL容量瓶，用甲醇稀释至刻度，即得黄芩苷对照品溶液。取复方鱼腥草颗粒样品，研细，精密称取1 g，准确加入70%乙醇25 mL，振摇使溶解，滤过。精密量取续滤液5 mL，置50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。取鱼腥草、板蓝根、金银花、连翘按本品的制备方法制成空白样品，按上述供试品溶液的制备方法制备，即得空白对照液。
2.3　色谱图　
将配制好的对照品、空白及供试品溶液在上述色谱条件下分别进样20 μL，见图1，由图可见，所测样品中黄芩苷峰与杂质峰完全分离，分离度佳，且无空白干扰。经用色谱图归一化(不同波长的色谱信号归一化，归化光谱几乎重合)、光谱图归一化(从色谱峰不同部位取光谱归一化，归化光谱几乎重合)、差光谱(接近于直线)及比率图法鉴定为纯峰。理论板数按黄芩苷峰计算不低于1500。

图1　色谱图
A.空白　B.供试品　C.黄芩苷对照品
1.黄芩苷

2.4　线性范围　
精密吸取对照品储备液1.0，3.0，5.0，7.0，9.0 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样20 μL测定，以黄芩苷的进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，回归处理得直线方程：

Y=2.81×10⁶ X-7.36×10⁴　r=0.999 9

线性范围为0.124～1.112 μg。
2.5　加样回收试验　
取已知黄芩苷含量的复方鱼腥草颗粒研细，精密称取9份，分别加入0.961 2，1.281 6，1.922 4 mg的黄芩苷对照品，按溶液的配制项下的方法，自“准确加入70%乙醇25 mL……”操作，进样20 μL，结果回收率为98.70%，99.35%，99.89%，RSD小于1.12%。
2.6　重现性试验　
平行6份样品，各取供试液20 μL进样，结果各份测得含量差异较小，平均0.52%(g/g)(n=6，RSD=0.82%)。
2.7　精密度试验　
同一对照品溶液连续进样6次，结果峰面积差异较小，RSD=0.81%(n=6)。
2.8　稳定性试验　
样品1份，分别于0，1，4，8，12，24 h取供试液20 μL进样测定其峰面积，计算含量，RSD=0.42%，说明样品稳定性好。
2.9　样品的测定　
取供试品溶液和黄芩苷对照品溶液20 μL，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰面积，按外标峰面积法计算含量。测定6批样品，结果含黄芩苷为0.51%～0.57%。

3　讨论
3.1　曾对流动相中磷酸不同浓度对峰形的影响进行了考察。实验表明随磷酸浓度的增加，峰形进一步变尖锐。但考虑到酸度对柱子的影响(要求流动相pH应大于2.0)，当流动相比例为甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)时最好，此时流动相pH为2.5左右，具有较好的峰形，分离效果佳。
3.2　黄芩苷可溶于乙醇溶液、甲醇、乙醚、醋酸乙酯或热冰醋酸；难溶于氯仿，不溶于水^［6］。根据本制剂的生产工艺，用70%乙醇即可将黄芩苷溶解制成供试液，无需复杂的提取方法。

作者单位：广西药品检验所 南京530021

参考文献
1　江苏新医学院.中药大辞典.下册.上海人民出版社，1977.2017
2　王本祥.现代中药药理学.天津科学科技出版社，1997.299
3　中国药典.1995，一部：270
4　杨桦，陈馥馨，刘雪峰等.双波长分光光度法测定小儿肺热咳喘口服液中黄芩苷的含量.中国中药杂志，1991，16(8)：474
5　中华人民共和国卫生部药品标准.新药转正标准.第十二册.31
6　林启寿.植物药品化学.北京：人民卫生出版社，1956.307

收稿日期:1999-02-11