胶束薄层色谱扫描法测定银黄片与银黄注射液中的黄芩苷与绿原酸*

　　银黄片和银黄注射液是由金银花提取物和黄芩苷制成的片剂和注射剂，具有清热解毒、抗菌消炎之功效，用于上呼吸道感染、急性扁桃体炎、咽炎、疮疖、脓肿等症。黄芩苷和绿原酸是银黄片与银黄注射液的主要成分，其含量测定方法有分光光度法^［1］、联立方程分光光度法^［2］、双波长分光光度法^［3，4］、纤维素薄层色谱-分光光度法^［3］、紫外分光光度法^［5］、聚酰胺薄膜薄层扫描法^［6］。胶束薄层色谱^［7］具有独特的分离选择性，且展开剂无毒、价廉、安全，已用于槐花中芦丁的分离鉴定^［8］。本文用胶束薄层色谱扫描法分离和测定了银黄片与银黄注射液中的黄芩苷和绿原酸，取得了较满意的结果。

1　仪器与试剂
　　日本岛津CS—930型双波长薄层扫描仪，微量进样器(上海医用激光仪器厂)，UV—1型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)。
层析聚酰胺薄片(浙江黄岩化学实验厂)，黄芩苷和绿原酸(98.2%)对照品(中国药品生物制品检定所)，十二烷基苯磺酸钠(SDBS)、Triton X-100(曲拉通X-100，进口分装)、丙酮、甲醇均为分析纯。水为二次蒸馏水。

2　薄层色谱分离、扫描条件
2.1　色谱分离条件　
固定相为聚酰胺薄片，展开剂为5% SDBS-7.5% Triton X-100-甲酸(4∶2∶2)，上行展开约12 cm，在紫外光(365 nm)下检视定位，黄芩苷呈暗褐色斑点(Rf=0.30)，绿原酸呈淡蓝色斑点(Rf=0.38)，见图1。

图1　薄层色谱示意图
1.黄芩苷对照品　2.银黄片　3.银黄注射液　4.绿原酸对照品

2.2　薄层扫描条件　
双波长反射法锯齿形扫描，散射参数SX＝3，狭缝1.2 mm×1.2 mm，灵敏度MED，以峰面积定量。黄芩苷λ_S=280 nm，λ_R=370 nm；绿原酸λ_S=325 nm,λ_R=350 nm。

3　对照品溶液的制备
精密称取黄芩苷对照品12.20 mg，加甲醇溶解并稀释至10 mL，浓度为1.22 mg^.mL^-1。精密称取绿原酸对照品16.00 mg，精密加甲醇8 mL溶解，浓度为2 mg^.mL^-1。

4　线性关系
精密吸取黄芩苷对照品溶液0.1，0.3，0.6，0.9，1.2，1.5 μL，依次点于同一聚酰胺薄片上，按选定的条件展开，扫描测定，以扫描峰面积值Y对点样量X(μg)线性回归，得回归方程：

Y=112.5+7 142X　r=0.999 2

黄芩苷点样量在0.122～1.83 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。
精密吸取绿原酸对照品溶液0.05，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8 μL，点于同一聚酰胺薄片上，展开，扫描测定，以峰面积Y对点样量X(μg)回归计算后得方程：

Y=1 492+9 803X　r=0.998 9

绿原酸点样量在0.1～1.6 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。
上述两标准曲线均不通过原点，故采用外标两点法进行含量测定。

5　稳定性试验
在聚酰胺薄片上分别点黄芩苷对照品溶液1 μL、绿原酸对照品溶液0.5 μL，展开后每隔20 min扫描测定1次，持续2 h，结果两者的扫描峰面积基本不变。

6　精密度试验
在同一聚酰胺薄片上点黄芩苷对照品溶液6点，点样量均为1 μL；在另一薄片上点绿原酸对照品溶液6点，均点样0.5 μL，然后分别依法展开，测定，得黄芩苷、绿原酸含量(每个斑点含量，μg)的RSD分别为3.3%和4.2%。

7　样品测定和回收率试验
7.1　样品测定　
银黄片去糖衣，研成细粉，取6份，每份约0.3 g，分别精密称定。精密加甲醇50 mL，浸泡48 h，其间振摇数次，滤过，滤液即为银黄片供试品溶液。精密吸取6份银黄注射液，每份1 mL，分别置10 mL容量瓶中，以甲醇定容，即得银黄注射液供试品溶液。分别吸取2种供试品溶液各0.5 μL点样，随行分别点黄芩苷对照品溶液0.6，1.5 μL和绿原酸对照品溶液0.05，0.4 μL，依法展开、扫描，以外标两点法定量，测得含量结果见表1。同时按文献［6］方法测定，测得结果见表1。
7.2　加样回收率试验　
取银黄片细粉6份，每份约30 mg，分别精密称定，加入黄芩苷对照品12.0 mg和绿原酸对照品1.0 mg，精密加甲醇10 mL；取0.50 mL银黄注射液6份，分别加入黄芩苷对照品8.0 mg和绿原酸对照品5.0 mg。按上述方法制备加样供试品溶液，依法操作，测得回收率，见表1。

表1　样品测定结果及回收率(n=6)

样品
名称

样品号

含量^*

回收率^**/%

黄芩苷

绿原酸

黄芩苷

绿原酸

银黄

当前位置：首页→技术中心→液相色谱论文√ 片

1

58.32

3.516

99.20(2.5)

102.54(1.4)

2

55.03

4.044

97.92(2.2)

99.41(1.6)

3

52.79

3.925

101.76(1.1)

102.27(2.8)

银黄注射液

1

17.93(18.27)

10.47(10.26)

96.85(2.9)

97.16(2.4)

2

18.56(18.28)

9.85(10.05)

98.52(1.8)

103.05(3.1)

3

17.34(17.68)

9.71(9.89)

99.04(2.7)

102.59(2.3)