高效液相色谱法测定洁脉冲剂中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量

　　洁脉冲剂是一种由何首乌、山楂等6味药材组成的复方新药，具有降血脂、预防或治疗动脉硬化的功效，临床上用于心脑血管疾病的治疗。何首乌作为该复方的君药，主要含有蒽醌类衍生物(大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等),是降血脂的有效成分^［1］,因此将何首乌中蒽醌类衍生物作为指标成分,测量其在成药中的含量,则可以建立较为有效可靠的质量标准,对于生产和使用中的质量检验和控制，都有较大的意义。目前，对蒽醌类衍生物较成熟的定量分析方法是高效液相色谱法^［2,3］。本文研究建立了用反相高效液相色谱法同时测定洁脉冲剂中大黄素（Emodin）、大黄酚（Chrysophanol）、大黄素甲醚（Physcion）含量的方法，该方法简便易行，快速、灵敏、有效。

1　仪器与试药
美国BECKMAN公司高效液相色谱系统：406系统控制器；110B高压泵；166紫外检测器。
大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品由中国药品生物制品检定所提供。
洁脉冲剂样品由清华永新药业公司提供，规格为每袋10g，标示量为每袋含大黄素3～4mg。
甲醇为色谱纯，氯仿为分析纯。

2　色谱条件
色谱柱：BECKMAN Ultrasphere ODS 分析柱（75 mm×4.6 mm, 3 μm）；流动相：甲醇-水（80∶20）；紫外检测波长254 nm；流速1 mL^.min^-1；柱温：室温。

3　线性关系考察
精密称取大黄素1.5 mg，大黄酚1.1 mg，大黄素甲醚2.0 mg，其中大黄素、大黄酚用甲醇溶解，大黄素甲醚用氯仿溶解，分别用甲醇定容至10 mL容量瓶中，配成3种对照品贮备液。将大黄素贮备液稀释成2.4，6，12，30，60 μg^.mL^-1,大黄酚贮备液稀释成1.76，4.4，8.8，22，44 μg^.mL^-1,大黄素甲醚贮备液稀释成1.6，4，8，20，40　μg^.mL^-1。按上述色谱条件，进样20 μL，测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，对照品进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的回归方程（n=5）分别为：

Y=54.385X+0.068 5　r=0.999 9
Y=71.985X-0.523　 r=0.999 8
Y=57.470X-0.638 1　r=0.999 8

线性范围分别为4.80×10^-2～1.20，3.52×10^-2～8.80×10^-1，3.20×10^-2～8.00×10^-1 μg。

4　精密度实验
取上述3种对照品贮备液各1 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得对照品混合溶液。取该混合溶液，按上述色谱条件进行含量测定，进样20 μL，色谱图见图1，各峰的保留时间为大黄素3.8 min，大黄酚5.6 min，大黄素甲醚8.4 min。重复进样5次，大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品峰面积积分值的RSD分别为1.1%，1.4%，1.2%。

图1　蒽醌类对照品与样品色谱图
A.对照品混合液　B.洁脉冲剂样品　C.阴性对照样品
1.大黄素　2.大黄酚　3.大黄素甲醚

5　样品测定
将成药样品研成粉末，精密称取约1 g，加入氯仿30 mL，加热回流提取30 min，残留物用同样方法再提取2次，合并提取液，蒸干溶剂，残留物加甲醇溶解，定容至10 mL容量瓶中，摇匀，用0.5 μm超微滤膜过滤，得供试品溶液。按上述色谱条件进行样品测定，进样20 μL，其色谱图见图1，以外标法计算样品中各组分的含量，测量3次，结果洁脉冲剂中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚平均含量分别为0.347 8，0.185 4，0.161 2 mg^.g^-1。

6　阴性对照实验
按照处方及生产工艺制备不含何首乌药材的阴性对照样品，取该样品1 g，按“样品测定”项进行操作，结果表明其它成分不影响大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的测定，说明上述3种成分来自于何首乌，其色谱图见图1。

7　加样回收率试验
取已测知含量的样品约1 g，加入对照品适量，按“样品测定”项进行操作，计算回收率，结果见表1。

表1　加样回收实验结果 （n=5）

成分

已测知含量
/mg^.g^-1

加入量
/ mg

平均回收率
/%

RSD/%

大黄素

0.3478

0.9～2.2

98.81

1.9

大黄酚

0.1854

1.1～1.8

99.44

3.2

大黄素甲醚

0.1612

0.7～1.7

98.83

2.8

8　讨论
8.1　何首乌中的主要有效成分是蒽醌类衍生物，据药典^［4］记载，何首乌中主要含有大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄酸和芦荟大黄素。在洁脉冲剂样品中，主要含有大黄素、大黄酚、大黄素甲醚，未能检测出大黄酸和芦荟大黄素。
8.2　以大黄素、大黄酚和大黄素甲醚作为洁脉冲剂的质量控制指标，可以反映该制剂的质量，是一种较为可靠和可行的检验指标。本方法能在较短时间（10 min）内对上述3种指标成分实现同时检测，是一种快速、简便、有效的分析方法。

作者单位：清华大学分析中心 北京100084
*联系人

参考文献
1　阴健，郭力弓主编. 中药现代研究与临床应用（1）.学苑出版社，1993.371
2　大岛俊幸, 平山总良, 王珂等. 高效液相色谱法测定何首乌和夜交藤中蒽醌类成分的含量.药物分析杂志, 1996, 16 (4)：219
3　曹红,刘云. 高效液相色谱法测定金薏尿石颗粒剂及大黄药材中大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚和芦荟大黄素的含量.药物分析杂志，1998，18 (1)：3
4　中国药典. 1990. 一部: 148

收稿日期:1998-08-20