RP-HPLC测定清眩丸中欧前胡素的含量

摘要　目的：建立反相高效液相色谱测定清眩丸中欧前胡素含量的方法。
方法：采用乙醇做溶剂，水浴加热回流提取。LUNA-C₁₈色谱柱分离测定，流动相为乙腈-水(53∶47)，流速1 mL^.min^-1，检测波长300 nm。
结果：欧前胡素与其相邻峰的分离度是1.5，理论板数按欧前胡素峰计算是16155，欧前胡素对照品线性范围是14.62～48.75 μg^.mL^-1，加样平均回收率98.0% 。
结论：用本文方法测定清眩丸中欧前胡素的含量，操作简便，结果准确。

Determination of Imperatorin in Qingxuan Wan by RP-HPLC

Tan Shengjian,Di Haitao, Lu Jiaqi,Fu Xiujuan and Chang Liangcai
(Institute for Durg Control of Commission of Science Technology and Industry
for National Defence, Beijing 100101)

Abstract　Objective：A reversed phase method was developed for the determination of imperatorin in Qingxuan Wan.Method: Sample was refluxed with ethanol in a water bath . Chromatographic conditions included a LUNA C₁₈. column,mobile phase, acetonitrile-water (53∶47), flow rate 1 mL^.min^-1; SPD-6AV uv-vis spectrophotometric detector at wavelength of 300 nm . Results:The number of theoretical plates calculated by imperatorin peak was 16155, R=1.5. The standard curve was linear in the concentration range of 14.62～48.75 μg^.mL^-1.The average recovery was 98.0%. Conclusion:The method was sensitive, rapid and accurate.
Key words　RP-HPLC, Qingxuan Wan , imperatorin

　　清眩丸由川芎、白芷、薄荷、荆芥穗、石膏5味药材加工而成，收载于中国药典1995年版一部。功能散风清热，用于治疗风热、头晕、目眩、偏正头痛、鼻塞牙痛。欧前胡素是白芷中重要活性成分^［1］。药典中以性状、显微鉴别、薄层鉴别和丸剂通则项下的检查方法检定清眩丸的质量。曾有文献报道用色谱法测定白芷或某些成药中欧前胡素的含量^［2，3］，但清眩丸中欧前胡素含量测定方法作者未见文献报道。

1　仪器与试药

　　日本岛津LC-6A液相色谱泵，SIL-6B自动进样器，SPD-6AV紫外-可见分光光度检测器，C-R6A色谱数据处理机。试验用药材购自北京药材公司并经本所鉴定，符合药典品种。欧前胡素对照品购自中国药品生物制品检定所；清眩丸由解放军第二炮兵药检所及本所制备；乙腈为色谱纯，乙醇为分析纯。

2　方法与结果

2.1　色谱条件　LUNA C₁₈分析色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）, 北京分析仪器厂ODS保护柱（5 mm×50 mm，5 μm）,柱温35℃；流动相乙腈-水（53∶47），流速1 mL^.min^-1；检测波长300 nm，进样量10 μL，记录纸速1 mm^.min^-1。
2.2　可行性　量取对照品贮备液（浓度为97.50 μg^.mL^-1的欧前胡素对照品乙醇溶液）5 mL，置25 mL量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，取 10 μL注入液相色谱仪；按清眩丸处方及制法制备不含白芷的阴性样品；取清眩丸及其阴性样品适量（约相当于白芷1 g），分别按样品测定项下方法提取，进样，色谱图见图1。由图1可知在本实验条件下清眩丸中其它成分对欧前胡素含量测定没有影响。欧前胡素峰保留时间约为16 min，欧前胡素与其相邻峰的分离度是1.5，以欧前胡素峰计算理论板数是16155。上述色谱条件可用于清眩丸中欧前胡素含量测定。

图1　欧前胡素色谱分离图
a.欧前胡素对照品　b.清眩丸阴性样品　c.清眩丸　1. 欧前胡素

2.3　线性关系　分别精密量取对照品贮备液适量，用乙醇稀释成5个浓度(14.62～48.75 μg^.mL^-1)，各取10 μL进样，记录峰面积。以欧前胡素峰面积均值X（n=3）对进样浓度Y（μg^.mL^-1）线性回归， 得回归方程：
Y＝0.00013047 X＋2.1378　r＝0.9999
信噪比为3时,最低检出浓度为0.1 μg^.mL^-1。
2.4　仪器精密度和方法重复性
取同一样品溶液5 h内重复进样（n=5），记录积分面积，RSD为1.03% 。
同一样品按含量测定方法重复取样测定（n＝5），求算含量，RSD为1.29% 。
2.5　加样回收　精密称取同一批号清眩丸6份。其中5份分别精密加入欧前胡素对照品，另外1份做空白。各份均依样品测定项下操作，测定含量，计算平均回收率为98.0%，RSD为1.87%（n=5）。
2.6　样品测定　取清眩丸3丸，剪碎，混匀。取4.1 g（约相当白芷1 g），精密称定，加硅藻土2 g，加乙醇适量，研匀。定量转移至100 mL磨口三角瓶中，加乙醇至约50mL，水浴加热回流提取40 min，滤至100 mL量瓶中，滤渣用约40 mL乙醇洗滤，洗滤液收集于同一量瓶内，冷至室温，加乙醇至刻度，摇匀。取少量用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，进样10 μL，记录欧前胡素色谱峰面积，外标法计算含量。测定3批样品，含量分别是每粒0.66、0.71和0.72 mg。

3　讨论

3.1　以乙醇为溶剂，考察了超声与水浴回流不同时间的提取效果，结果超声60 min 为回流20 min的96%；以回流40 min为100%计，回流20、60、90 min分别为100%、100%、98%。
3.2　将样品溶液置棕色量瓶中，在试验温度下(18℃)，经稳定性观察，欧前胡素至少在48 h内稳定。

作者简介　卢嘉琪　常良才：中国人民解放军第二炮兵药检所
作者单位：国防科工委药检所　北京9702信箱15号　100101

参考文献

1　阴建，郭力弓.中药现代研究与临床应用. 第一卷.北京：学苑出版社，1995. 259
2　陈燕祥，沈安华.白芷中欧前胡素的薄层扫描测定. 中成药研究，1991，11（6）：26.
3　黄新生.高效液相色谱法定量测定辛芩冲剂中欧前胡素的含量. 中草药，1988，19(6)：19

(本文于1998年4月6日收到)