罗红霉素及其制剂含量测定方法的研究

摘要目的：建立测定罗红霉素及其制剂含量的方法。
方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为Autoscience Kromasil C₁₈柱，流动相为乙腈-甲醇-0.5%乙酸铵(100∶60∶60)，检测波长为235 nm。
结果：精密度及稳定性均良好；在0.2～1.5 mg^.mL^-1范围内，峰面积与浓度(mg^.mL^-1)呈良好的线性关系，r=0.999 9；平均回收率为99.56%，RSD为0.89%，n=5；罗红霉素与其它杂质峰分离度符合要求。
结论：本方法简便、专属、重现性好，可用于罗红霉素及其制剂的含量测定。

Studies on Assay of Roxithromycin and Its Preparations

Li Qingcui,Liu Yuzhen and Li Furong
(Shanxi Provincial Institute for Drug Control,Taiyuan　030001)

AbstractObjective：This study was designed to develop a method for assay of roxithromycin and its preparations.
Methods:Used a HPLC method by Autoscience Kromasil C₁₈ column.The mobile phase was a mixture of acetonitrile-methanol-0.5% ammonium acetate(100∶60∶60),with the detection wavelength at 235 nm.
Results:Precision and stability were fine.The linear correlation was observed from the concentrations of 0.2 to 1.5 mg^.mL^-1(r=0.999 9).The average recovery was (99.56±0.89)%.Resolution between roxithromycin and other peaks met the requirements.
Conclusion:The method was convenient,selective and reproducible for assay of roxithromycin and its preparations.
Key words　roxithromycin,HPLC

　　罗红霉素(Roxithromycin)是一种新的半合成大环内酯广谱抗生素^［1］。其原料药及其制剂(罗红霉素片、罗红霉素分散片)在国内已有生产，但尚无正式的国家药品标准，厂方使用的质量标准为卫生部审批的新药试行标准，采用微生物检定法。日本抗生物质医药品基准解说^［2］收载的为HPLC法，要求柱温在50 ℃才较理想，条件较为苛刻。本文报道一简便、快速、专属性强、重现性好的HPLC法。

1　仪器与试药
日本岛津LC—10A高效液相色谱仪；SPD—10A可调波长紫外检测器；C—R6A数据处理机。
罗红霉素、罗红霉素片和罗红霉素分散片均由国内3家药厂提供；罗红霉素对照品由天津中美史克制药有限公司提供，纯度为97.8%；乙腈、甲醇均为色谱纯，乙酸铵为分析纯，水为去离子重蒸水。

2　色谱条件
色谱柱：Autoscience Kromasil C₁₈ 5 μm(200 mm×4.6 mm)；流动相：乙腈-甲醇-0.5%乙酸铵(100∶60∶60)；流速：1.0 mL^.min^-1；柱温：20 ℃；检测波长：235 nm；进样量：20 μL。

3　溶液的配制
对照品溶液的配制：取罗红霉素对照品约100 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加流动相振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀。
罗红霉素供试品溶液的配制：取本品约100 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加流动相振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀。
罗红霉素片和分散片供试品溶液的配制：取本品20片，研细，精密称取适量(约相当于罗红霉素100 mg)，置100 mL量瓶中，加流动相振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。

4　方法学考察
4.1　线性关系考察　
取罗红霉素对照品适量，加流动相制成2.5 mg^.mL^-1的溶液，精密量取1，2，3，4，5，6 mL，分别置10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。进样20 μL测定，以罗红霉素峰面积为纵坐标，浓度(mg^.mL^-1)为横坐标作图，求回归方程，结果浓度在0.2～1.5 mg^.mL^-1范围内线性关系良好。回归方程为：

Y=151 288.12X+357.47　r=0.999 9

4.2　精密度实验　
取罗红霉素片的供试品溶液，连续进样6次，计算峰面积的RSD为0.52%。
4.3　稳定性实验　
取罗红霉素片的供试品溶液，每隔1 h测定1次，结果表明测定液至少在10 h内稳定，RSD为0.78%，n=11。
4.4　回收率实验　精密称取已知含量的罗红霉素分散片适量(约相当于罗红霉素50 mg)，共5份，分别置100 mL量瓶中，加入罗红霉素对照品约50 mg，按照罗红霉素分散片供试品溶液的配制方法配制溶液，依法测定，计算平均回收率为99.56%，RSD为0.89%(n=5)。

5　原料药及其制剂的含量测定
分别取上述对照品溶液和3种供试品溶液，按本文色谱条件分别进样测定，见图1。本法测定结果与微生物检定法比较，结果见表1。

图1　色谱图
A.罗红霉素　B.罗红霉素片　C.罗红霉素分散片
1.罗红霉素(5.19 min)

表1　样品测定结果(%，n=3)

样品

批号

HPLC法

微生物检定法

原料药

1

97.3

96.4

2

97.7

95.7

3

97.1

95.2

片剂

1

100.6

98.89

2

99.12

97.98

3

100.0

98.46

分散片

1

100.9

98.01

2

100.5

98.52

3

99.87

97.89

　　注：片剂、分散片的含量为标示量%

6　讨论
用紫外分光光度法，在200～400 nm波长范围内扫描，罗红霉素在212 nm波长处有最大吸收。文献报道采用末端吸收波长^［3］或测定中改变检测波长^［4］来检测罗红霉素，我们试用后，均不十分理想。罗红霉素在210 nm检测时，试剂可能有吸收；在215～230 nm检测时， 制剂辅料出现较强的吸收峰，均干扰罗红霉素主峰的测定。因为HPLC检测波长不一定是最大吸收波长，因此本文采用235 nm检测，虽然在最低检出量上作了一点牺牲，但可提高进样剂量来弥补因检测波长的提高而吸收度下降的不足，以达到定量的要求，并可排除辅料和其它杂质峰的干扰。

作者单位：山西省药品检验所 太原030001

参考文献
1　黄海华.两种新型的红霉素衍生物clarithromycin和roxithromycin.沈阳药学院学报，1994，11(3)：228
2　日本厚生省.日本抗生物质医药品基准解说.东京：药业时报社，1993.663
3　秦永平，黄英，梁茂植等.血清中罗红霉素的反相高效液相色谱法测定.药物分析杂志，1997，17(4)：249
4　吴振洁，李敏伶，叶飞云.改变检测波长高效液相色谱法测定罗红霉素片的含量.中国抗生素杂志，1997，22(6)：187

收稿日期:1998-06-29