盐酸头孢他美酯及片剂的HPLC测定

摘要目的：采用HPLC法测定盐酸头孢他美酯原料药及其片剂的含量。
方法：以Nova-PakC₁₈为色谱柱，乙腈-甲醇-水-磷酸盐缓冲液(360∶95∶500∶45)为流动相，检测波长为263nm。
结果：线性关系r=0.9999，平均回收率为99.94%，RSD=0.44%(n=5)。
结论：方法简便、准确，适用于该产品的质量检验分析。

HPLC Determination of Cefetamet
Pivoxil Hydrochloride and Its Tablets

Wang Jian
(Zhejiang Institute for Drug Control,Hangzhou 310004)

AbstractObjective：Cefetamet pivoxil hydrochloride and its tablets were determined by a new HPLC method.
Method:The separation was performed on a Nova-Pak C₁₈ column.The mobile phase was composed of acetonitrile-methanol-water-phosphate buffer(360∶95∶500∶45).The UV detector was set at 263 nm.
Results:The average recovery was 99.94%(RSD=0.44%,n=5),with good linear relationship (r=0.9999).
Conclusion:The method was simple and accurate and can be used for the quality control of cefetamet pivoxil hydrochloride and its tablets.
Key words　cefetamet pivoxil hydrochloride,HPLC,cefetamet pivoxil hydrochloride tablets

　　盐酸头孢他美酯是新型头孢类抗生素，收载于《日本抗生物质医药品基准解说》1993年版^［1］，试剂需进口，本文改进了盐酸头孢他美酯及片剂HPLC测定的色谱条件，结果满意。

1　仪器、试药
1.1　仪器　
日本岛津LC-6A高效液相色谱仪，SPD-6AV检测器，C-R4A色谱数据处理仪。
1.2　试药　
盐酸头孢他美酯对照品，上海药品质量标准研究所标化，含量为71.6%(按头孢他美计)；盐酸头孢他美酯原料、片剂，由浙江康裕制药有限公司提供；甲醇、乙腈为色谱纯试剂。

2　色谱条件
色谱柱：大连化物所Nova-Pak C₁₈柱(4.6mm×200mm，4μm)；流动相：乙腈-甲醇-水-磷酸盐缓冲液(取无水磷酸氢二钠5.8g与磷酸二氢钾3.5g，加水溶解并稀释成1000mL)(360∶95∶500∶45)；流速：1.0mL^.min^-1；检测波长：263nm；进样量：20μL。在本色谱条件下得到的主药与杂质色谱图见图1-A、B，按盐酸头孢他美酯峰计算理论板数为5500。

图1　色谱图
A.盐酸头孢他美酯　B.原料药有关物质检查　C.空白辅料
1.头孢他美酸　5.盐酸头孢他美酯　2、3、4、6.未知杂质

3　专属性
3.1　原料、中间体　
根据生产工艺，其可能引入的杂质主要有原料7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-ADCA)、AE活性酯，中间体头孢他美酸。取该3种杂质照含量测定项下方法进样，记录色谱图，保留时间7-ADCA为1.9min、AE活性酯为14.5min，头孢他美酸为2.1min，在该色谱条件下盐酸头孢他美酯(保留时间8.7min)与这3种杂质能完全分离。
3.2　高温试验　
样品在120℃加热6h，在保留时间2.1min处产生一分解产物，与主峰能完全分离。
3.3　光照试验　
样品在澄明度测定仪下，以3000lx光照度放置1d，在保留时间12.4min处产生一分解产物，与主峰能完全分离。
3.4　空白辅料　
根据盐酸头孢他美酯片的处方，制备不含盐酸头孢他美酯的空白片，照含量测定项下方法处理、进样，结果表明辅料不干扰盐酸头孢他美酯的测定，见图1-C。

4　杂质峰归属
前述专属性试验表明，样品中保留时间为2.1min的杂质与头孢他美酸的保留时间一致，证明此杂质为头孢他美酸。

5　线性关系
取盐酸头孢他美酯对照品适量，精密称定，加流动相制成2.4mg^.mL^-1的溶液，分别精密量取此液1、2、3、4、5mL，用流动相稀释至25mL，精密量取20μL注入色谱仪，测定。在1.9～9.6 μg范围内色谱峰面积(A)与进样量(X)呈良好的线性关系，回归方程：

A=-7.59×10+6.40×10⁴X　r=0.9999

6　重复性试验
　　取同一样品，分别进行样品溶液的制备、测定，重复5次，结果RSD为0.95%。

7　回收率测定
　　取盐酸头孢他美酯适量，精密称定，按照盐酸头孢他美酯片处方制备模拟样品5份。各份均依片剂含量测定项下方法操作，计算回收率。平均回收率为99.94%，RSD为0.44%(n=5)。

8　原料药有关物质及其含量测定
取盐酸头孢他美酯原料药适量，精密称定，加流动相制成每1 mL中约含0.2mg的溶液，照前述色谱条件进行分离测定，记录色谱图至主峰保留时间的2倍。结果见表1。

表1　原料药有关物质及其含量测定结果(%，n=2)

批　　号

有关物质

原料药(按头孢他美计)

970602

1.6

68.7

970528

1.0

72.4

970529

1.6

69.4

9　片剂含量测定
取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸头孢他美酯20mg)，置100mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液进行HPLC测定，外标法计算。3批样品测定结果(标示量%)分别为94.2%、93.5%、90.4%。

10　讨论
10.1　本品合成过程中可能会带进原料、中间体、副产物等杂质，且本品遇光、遇热均不稳定，易产生分解产物。专属性研究表明，本法能有效地分离这些杂质，原料、中间体、分解产物及辅料均不干扰盐酸头孢他美酯测定。
10.2　本法色谱条件简单，在乙腈-甲醇-水流动相中，色谱峰扩散、拖尾，加入磷酸盐缓冲液后色谱峰变窄、拖尾现象消失。
10.3　本品用流动相溶解后立即进样，测得主峰峰面积为180192，有关物质1.6%，4h后再进样测定，主峰峰面积为179507，有关物质1.5%，表明用本法流动相配制的样品溶液稳定。
10.4　盐酸头孢他美酯的抗菌活性是通过吸收进入体内水解成头孢他美酸后起作用的，含量应以有效部分头孢他美计，因此原料药的含量及片剂的规格均按头孢他美计。

作者单位：浙江省药品检验所 杭州310004

参考文献
1　日本抗生物质医药品基准解说.1993.223

收稿日期:1998-06-11