应用HPLC/ELSD法测定西洋参中拟人参皂苷F11的含量

摘要目的：测定西洋参中拟人参皂苷F₁₁的含量。
方法:应用高效液相色谱法－蒸发光散射检测器(HPLC/ELSD), Platinum C₁₈色谱柱，乙腈-水（30∶70）为流动相，并优化选择了蒸发光散射检测器参数,测定了西洋参中拟人参皂苷F₁₁的含量。
结果:拟人参皂苷F₁₁在2.192～10.96 μg范围内呈良好线性(r＝0.9992,n=5),回收率为(102.6±4.1)%。
结论:本方法精密度、重现性良好，适用于人参皂苷类成分的分析测定。

Application of HPLC/ELSD on Quantitative Determination of
Pseudoginsenoside F₁₁ in Radix Panacis Quinquefolii

Tang Jun
(Wuhan Municipal Institute for the Drug Control, Wuhan　430012)
Lu Jing
(National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, Beijing　100050)

AbstractObjective：To establish the determination method of Pseudoginsenoside F₁₁ in Radix Panacis Quinquefolii.
Method: A HPLC method using evaporative light scattering detection has been developed to determine Pseudoginsenoside F₁₁ in Radix Panacis Quinquefolii on platinum C₁₈ column using Acetonitrile-water(30∶70) as mobile phase. Meanwhile, the optimum conditions for the detector working and the chromatographic separation were established.
Result: Linear range of Pseudoginsenoside F₁₁ was 2.192～10.96 μg (r＝0.9992,n=5), the mean recovery was (102.6±4.1)%.
Conclusion:the precision and repeatability of this method are good respectively, and this method can be applied to the analysis of ginsenoside components.
Key words　Radix Panacis Quinquefolii，Paeudoginsenoside F₁₁，HPLC/ELSD

　　西洋参为五加科植物西洋参(Panax quinquofolium L.)的干燥根，卫生部进口药材质量标准及中药材部颁标准中均有收载。与同属的人参相比，西洋参亦具有广泛的药理作用，且含多种人参皂苷类活性成分，其中拟人参皂苷F₁₁（Pseudoginsenoside F₁₁）为西洋参中的特征性成分^［1］。在上述标准中，西洋参的含量测定方法是以重量法和比色法测定其总皂苷的含量，方法的灵敏度和准确度较低，此外，在用高效液相色谱法分析皂苷类成分时，又多因检测方法的局限而难以得到令人满意的结果^［2］。大量研究表明，蒸发光散射检测器（ELSD）是一种通用型检测器^［3］，国内外已有报道成功用于不挥发性天然成分如人参皂苷类、萜类内酯等的分析^［4］。为了更好地对西洋参药材进行质量评价和制定更完善的控制指标，本文采用高效液相色谱法－蒸发光散射检测器测定西洋参中拟人参皂苷F₁₁的含量，并考察了不同产地西洋参药材F₁₁含量的变化情况。

1　仪器与试药
LC-6A型高效液相色谱泵（日本岛津），7725型进样器（美国Rheodyne公司）, ELSD 500检测器（美国Alltech公司），GCK 3302全自动空气源（北京中惠普），3295积分仪（上海惠普）。
色谱纯乙腈（天津三达生物医学工程有限公司），水为蒸馏水。
拟人参皂苷F₁₁对照品原料由陕西省药品检验所提供,含量测定数据与文献报道^［5］一致，归一化法含量大于99％。
西洋参药材来源分别为（1）万基牌花旗参；（2）～（6）分别为不同产地国产栽培西洋参。

2　测定条件
2.1　色谱条件　
色谱柱为Platinum C₁₈(5μm，150mm×4.6mm)(美国Alltech公司）, 流动相为乙腈-水（30∶70）,室温,流速为1.0mL^.min^-1。在此色谱条件下，拟人参皂苷F₁₁保留时间为6.3 min，以F₁₁色谱峰计柱效为2605，F₁₁与相邻色谱峰分离度为1.4。色谱图见图1。

图1　拟人参皂苷F₁₁高效液相色谱分离图
A.拟人参皂苷F₁₁对照品　B.供试品
1.拟人参皂苷F₁₁

2.2　供试品溶液制备　
取药材粗粉1g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40mL，冷浸30 min，再加甲醇适量，回流6h，提取液回收甲醇并浓缩至干，残渣加水25mL，分次微热使溶解并转入分液漏斗中，用乙醚萃取2次，每次10mL,弃去萃取液；水液用水饱和正丁醇萃取4次，每次20 mL,合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗2次，每次10mL,分取正丁醇液，蒸干。残渣用甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.5μm微孔滤膜，作为供试品溶液。
2.3　对照品溶液制备　
取拟人参皂苷F₁₁对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液并过0.5μm微孔滤膜，作为对照品溶液。

3　方法学考察
3.1　检测器参数的优化　
根据流动相种类和比例，首先设置漂移管温度为102℃，气体流速为2.75L^.min^-1,通过观察在不同漂移管温度和不同载气流速进样时拟人参皂苷F₁₁的信号强度，最后确定漂移管温度为107℃，气体流速为2.26L^.min^-1为实验最优条件。
3.2　线性关系考察　
精密称定拟人参皂苷F₁₁对照品适量，加甲醇制成每1mL含1.0960mg的溶液，作为对照品溶液。精确吸取对照品溶液2、4、6、8和10μL分别注入色谱仪，测定峰面积，经拟合，以进样量(X)的自然对数为横坐标，峰面积值(Y)的自然对数为纵坐标，线性回归方程为：

lnY＝11.9712＋1.6202lnX　r＝0.9992

表明进样量在2.192～10.96μg之间线性良好。另直接以进样量为横坐标，峰面积值为纵坐标线性方程为：

Y＝-1511965＋795008X　r＝0.9952

显然不如对数拟合线性关系好。
3.3　精密度试验　
同一份样品，相同体积，重复进样6次，拟人参皂苷F₁₁峰面积积分值的RSD为2.2%。
3.4　重复性试验　
同一批样品，按样品制备方法平行制备5份，依法测定，含量平均值为0.2821％,RSD为2.2％。
3.5　回收率试验　
分别称取已知含量的西洋参样品约0.5g,精密加入1.3930mg^.mL^-1拟人参皂苷F₁₁对照品溶液1mL, 按样品测定方法制备供试品溶液，依次测定，结果平均回收率为102.6％，RSD为4.1%。

4　样品测定
分别取不同来源西洋参样品, 依法制备成供试品溶液, 分别进样测定, 以外标两点对数方程计算, 结果见表1。

表1　样品中拟人参皂苷F₁₁含量测定结果(n=4)

样　品

含量/％

RSD/％

1

0.1728

2.5

2

0.2861

2.2

3

0.0817

1.8

4

0.2740

2.2

5

0.0804

2.0

5　讨论
5.1　曾试验加热回流4h、索氏提取4h处理样品，结果用索氏提取4h后测得拟人参皂苷F₁₁含量较高，另参考了部颁标准中西洋参含量测定项下西洋参总皂苷的提取方法，最后选择了正文方法作为样品的制备方法。
5.2　在色谱条件优化中, 分别试验了甲醇-水（55∶45）、乙腈-水（30∶70）、乙腈-水-异丙醇（27∶70∶3）等若干不同流动相以考察西洋参各皂苷成分的分离情况及检测灵敏度，结果用乙腈-水（30∶70）为流动相时，拟人参皂苷F₁₁峰形与其它成分色谱峰分离均较好，且有利于改进检测灵敏度，故选定为本实验流动相系统。
5.3　不同产地的西洋参中拟人参皂苷F₁₁含量差异显著, 是否与引种栽培的环境有关或加工方法不同所致, 尚待进一步验证。
5.4　在用ELSD检测时，基线相当稳定，重现性、灵敏度均较好，且通过自然对数拟合，峰面积值与进样量之间呈良好的线性关系，对只有紫外末端吸收的非挥发性成分分析不失为一种理想的通用型“质量”检测器。

作者单位：汤俊 武汉市药品检验所 430012
鲁静 中国药品生物制品检定所 北京100050

参考文献
1　中华人民共和国卫生部.进口药材部标准. WS4-16-86
2　刘军,王燕桓,傅承光.高效液相色谱法分析人参皂甙.药物分析杂志，1998，18(2)：132
3　冯埃生,邹汉法,汪海林等.影响高效液相色谱/挥发激光散射检测器检测性能基本因素的考察.药物分析杂志，1996,16(6):414
4　Man Ki Park, Jeong Hill Park, Sang Beom Han,et al.High-performance liquid chromatographic analysis of ginseng saponins using evaporative light scattering detection. J Chromatogr A,1996, 736: 77
5　马兴元,王广树,王陆黎等.西洋参茎叶三萜皂甙的化学研究.中国药学杂志，1993，28（12），718

收稿日期:1998-05-18