高效液相色谱法测定复方利多卡因气雾剂中利多卡因和醋酸氯己定的含量

　　复方利多卡因气雾剂具有止痛、止痒、消炎镇痛作用，用于一般擦伤、损伤、软组织损伤等。其主要含有利多卡因(Ⅰ)、醋酸氯己定(Ⅱ)、苯扎溴铵(Ⅲ)三组分。现行地方标准^［1］采用双波长法及三波长法分别对其中的2个组分Ⅰ和Ⅱ进行定量，但影响该方法测定准确性的因素较多。本文采用甲醇-水相(取醋酸铵5.2 g、三乙胺7.4 mL，加水至1000 mL，冰醋酸调pH至4.0)，(62∶38)为流动相，筛选出醋酸氢化可的松为内标，考察了色谱体系中各因素对色谱保留的影响。在本文所用色谱条件下成功分离并测定了组分Ⅰ和Ⅱ的含量。方法简便、准确。

1　仪器与试药

　　岛津LC-10AD泵，SPD-10A紫外可见光检测器，C-R7A数据处理机。
复方利多卡因气雾剂由无锡某药厂提供，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均系符合中国药典规格的原料药。醋酸氢化可的松(中国药品生物制品检定所)。所用试剂均为分析纯。

2　色谱条件

　　色谱柱：Shim-pack CLC-ODS（5　μm，15 cm×4.6 mm)；流动相：甲醇-水相(醋酸铵5.2 g和三乙胺7.4 mL，加水至1000 mL，冰醋酸调pH至4.0)(62∶38)；流速：1.0 mL^.min^-1；柱温：35 ℃；检测波长：235 nm;AUFS：0.064；进样量：5 μL。
在本文色谱条件下样品的色谱图见图1。

图1　样品色谱图
1.利多卡因(3.83 min)　2.醋酸氯己定(8.21 min)
3.醋酸氢化可的松(10.20 min)

3　线性试验

　　取醋酸氢化可的松约38 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇31 mL溶解后，以水相稀释至刻度。即得内标溶液。
精密称取减压干燥至恒重的Ⅰ和105 ℃干燥至恒重的Ⅱ，置同一量瓶中，用流动相配制成6 g^.L^-1和1.5 g^.L^-1的溶液，分别取此液0.5、0.8、1.0、1.2、1.5 mL置25 mL量瓶中，各精密加入内标溶液2.0 mL，用流动相稀释至刻度，量取5 μL，进样，测定。以各组分与内标的峰面积比Y对浓度C(g^.L^-1)回归，Ⅰ与Ⅱ的回归方程分别为：
Y=-0.004189+3.680C　r=1.0000
Y=-0.006354+17.65C　r=0.9999
线性范围分别为0.1～0.4 g^.L^-1和0.03～0.09 g^.L^-1。

4　回收率试验

　　精密称取Ⅰ和Ⅱ置同一量瓶中，同时加入处方比例的其他组分，用流动相配制成Ⅰ和Ⅱ分别为6 g^.L^-1和1.5 g^.L^-1的溶液。精密量取此液1.0 mL置25 mL量瓶中，精密加入内标溶液2.0 mL，用流动相稀释至刻度，依法测定，按内标法计算，Ⅰ和Ⅱ的平均回收率±RSD分别为(99.8±0.47)%，(99.6±0.42)%，n=5。

5　样品测定

　　取本品1瓶，精密称定重量，在铝盖上钻一小孔，插入连有干燥橡皮管的注射针头，橡皮管的另一端通入盛有20 mL甲醇的50 mL量瓶中，待抛射剂缓缓排出后除去铝盖，将内容物用甲醇移至量瓶中，并用甲醇稀释至刻度。按回收率试验项下测定。将空瓶连同阈门铝盖烘干，精密称定重量，与原来重量之差即为药液重量。计算组分Ⅰ和Ⅱ的含量，并与原测定方法^［1］比较，结果基本一致。见表1。

表1　样品含量测定结果(%，g^.g^-1，n=2)

批号

组分Ⅰ

组分Ⅱ

本法

原法

本法

原法

960403

2.06

2.04

0.43

0.45

970401

2.12

2.14

0.47

0.49

980301

2.09

2.11

0.49

0.50

6　讨论

　　考虑到使组分Ⅰ和Ⅱ具有相近的峰面积，故采用235 nm作为测定波长。原标准^［1］中未对组分Ⅲ进行定量。本文曾尝试同时对组分Ⅲ定量。但Ⅲ在230～300 nm之间吸收系数很小，且样品中组分Ⅲ含量较低，故不易定量。采用比样品测定中组分Ⅲ相应浓度高100倍的溶液依法测定，可见组分Ⅲ的t_R为5.2 min。故组分Ⅲ对本文测定结果不影响。
组分Ⅱ的亲硅醇基效应极为明显，本文采用三乙胺掩盖键合相表面的硅醇基，效果显著。三乙胺及醋酸铵浓度的提高，有助于改善组分Ⅱ的峰形，但高于本文所用浓度，峰形改善不明显。采用本文所用流动相条件，可得到较为满意的分离效果。

作者单位：无锡市药品检验所　214021

参考文献

1　江苏省药品标准(92)第25号

(本文于1998年5月11日收到)