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氯地霜是以氯霉素和醋酸地塞米松为主药,以硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、硬石蜡、凡士林、液体石蜡、甘油、三乙醇胺、尼泊金乙酯等为基质的乳剂型基质乳膏,临床上主要用于皮炎、湿疹、脂溢性皮炎、痤疮等症,效果良好。由于组分含量差别悬殊,基质成分干扰严重,紫外分光光度法[1]很难进行分离和测定,双波长等[2~4]计算分光光度法测定又存在霜剂基质成分复杂,组分质量时有差异,测定结果误差较大的问题。本文经过实验研究,选用了专属性较强的HPLC方法测定乳剂中氯霉素和醋酸地塞米松的含量,获得了比较理想的结果。 1 仪器与试药 PE-250型液相色谱泵、1020型积分仪、295型UV/VIS检测器。 2 色谱条件 色谱柱:PE-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:甲醇-水(70∶30),流速:0.5 mL.min-1;检测波长:240 nm;灵敏度:0.05AUFS;纸速:8 mm.min-1。 3 对照品贮备溶液的制备 精密称取氯霉素和醋酸地塞米松对照品适量,用甲醇溶解并稀释成含量分别为20 mg.mL-1和0.25 mg.mL-1的混合溶液,摇匀。 4 系统适用性试验 精密量取对照品贮备液2.5
mL,置50 mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,在选定的色谱条件下,精密量取对照品溶液5
μL进样,色谱图见图1-A,氯霉素和醋酸地塞米松的保留时间分别为3.90、10.68
min;理论板数分别为2455、3950;二者的分离度为13.6。 |
图1 氯霉素和醋酸地塞米松(A)及其乳膏(B)、基质(C)的色谱图 5 线性试验 精密量取对照品贮备溶液1.5、2.0、2.5、3.0、3.5
mL,分别置于50 mL量瓶中,用甲醇稀释定容,在上述色谱条件下,分别进样5
μL,记录峰面积。以组分峰面积X对浓度Y回归,得氯霉素及醋酸地塞米松的线性回归方程分别为: 6 样品测定 取本品适量(约相当于氯霉素50 mg,醋酸地塞米松0.625 mg),精密称定,置小烧杯中,加甲醇适量,置80 ℃水浴中加热2 min,如此反复提取3次,放冷,过滤至50 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,置水浴中冷却2 h以上,取出后迅速滤过,弃去初滤液,取续滤液作为供试品溶液。取含氯霉素1 mg.mL-1、醋酸地塞米松12.5 μg.mL-1的对照品溶液和样品溶液各5 μL,分别注入液相色谱仪,记录峰面积,外标法计算2种成分在乳膏中的含量,结果见表1。 表1 样品含量测定结果(标示量%,n=3) |
批号 | 氯霉素 | 醋酸地塞米松 | ||
971027 | 101.5 | (0.78) | 16.0 | (1.1) |
971112 | 91.0 | (0.36) | 48.9 | (0.90) |
971229 | 106.1 | (0.50) | 72.4 | (0.92) |
980216 | 99.3 | (0.46) | 70.9 | (0.76) |
注:括号内为RSD(%) 7 加样回收试验 精密称取已知含量的乳膏样品适量(约相当于氯霉素50 mg、醋酸地塞米松0.625 mg),分别精密加氯霉素对照品40、50、60 mg;醋酸地塞米松对照液(0.25 mg.mL-1)2.0、2.5、3.0 mL,按样品含量测定项下方法提取,置100 mL量瓶中,并依法进行色谱测定,计算回收率,结果见表2。 表2 回收率测定结果(n=5) |
成分 | 加入量/mg | 平均回收率/% | RSD/% |
氯霉素 | 38.5~41.5 | 99.2 | 0.9 |
48.5~51.5 | 99.6 | 1.2 | |
58.5~61.5 | 99.8 | 1.2 | |
醋酸地塞米松 | 0.51 | 100.2 | 1.2 |
0.64 | 99.5 | 1.3 | |
0.77 | 100.7 | 1.2 |
8.1 检测波长的选择 本品中氯霉素和醋酸地塞米松的含量相差悬殊(98.8∶1.2),为了提高醋酸地塞米松的检测灵敏度,实验选择醋酸地塞米松的最大吸收波长240
nm为测定波长。 |
图2 醋酸地塞米松分解物的干扰实验 8.3 分解物的干扰实验 实验发现:本品中醋酸地塞米松的回收实验较理想,但送检样品中醋酸地塞米松的含量多偏低,贮存期样品尤甚。经分析是制剂中醋酸地塞米松已部分分解成地塞米松[6]的缘故(分解原因、速率及制剂稳定性、疗效待研究)。对本文建立的含量测定方法进行分解物的干扰试验,结果该分解物(地塞米松)的tR为7.2 min,不干扰氯霉素(tR=3.90 min)和醋酸地塞米松(tR=10.68 min)的测定,与基质中尼泊金乙酯(tR=5.53 min)也有较好的分离度,见图2。故本文建立的HPLC同时测定氯地霜中氯霉素和醋酸地塞米松两组分含量的方法是专属性较强、准确可靠的方法。用此法研究本制剂中醋酸地塞米松的分解速率也是很有效的。 作者单位:广西柳州市药品检验所 545001 参考文献 1 中国药典.1995.二部:971,1076,1077 (本文于1998年4月23日收到) |