高效液相色谱法测定胃利胶囊中橙皮苷的含量

摘要　目的：建立胃利胶囊中橙皮苷含量测定方法。
方法：用高效液相色谱法测定。选用YWG－C₁₈分析柱(4.6 mm×250 mm，10 μm)，流动相:乙腈－水－甲醇－磷酸(20∶79.6∶0.4∶0.01)，检测 波长：283 nm，流速：1.5 mL^.min^-1，柱温：室温。
结果：本法简便、灵敏、准确。线性范围：0.2～1.5 μg(r=0.9993)。平均回收率：99.39%，RSD=3.5%。
结论：建立的定量方法可用于胃利胶囊的质量控制标准。

Determination of Hesperidin in Weili Capsule by HPLC

Wang Xiaofeng，Duan Xiujun，Pei Xiaoli and Zhu Xiuzhen
(Shanxi Institute of Materia Medica,Taiyuan 030045)

Gao Yanping and Zhong Yucong
(Shanxi College of Traditional Chinese Medicine，Taiyuan 030024)

Abstract　Objective：To establish the method of determination of the content of hesperidin in Weili capsule.Method:HPLC was used, the HPLC system consisted of YWG-C₁₈ Column(4.6 mm×250 mm,10 μm), methylcyanide－water－methanol－phosphoric acid(20∶79.6∶0.4∶0.01)mixture as mobile phase, with detection at 283 nm, flow rate 1.5 mL^.min^-1 and column temperature at room temperature.Results:This method is simple，sensitive and accurate. The linear range was 0.2～1.5 μg(r＝0.9993), The mean recovery was 99.39%,RSD=3.5%.Conclusion:The established method can be used for quality　control standard of Weili capsule.
Key words　heperidin, HPLC, WeiLi capsule

　　胃利胶囊由白术、枳实、柴胡、山楂等药味组成，本处方是在张仲景名方枳术丸基础上加味组成的复方制剂，具有健脾消痞、理气和中的功效，临床用于胃肠动力障碍所致脘腹痞满、呕吐反胃、纳呆、泛酸等属脾虚气滞、胃失和降者。为有效控制产品质量，保证临床用药安全有效，参考文献报道^［1～3］，本文研究建立了高效液相色谱法测定处方中枳实所含橙皮苷(Hesperidin)的方法，现报道如下：

1　仪器与试药

　　高效液相色谱仪　Beckman 338、427型数据处理机；406型紫外检测器；橙皮苷购自中国药品生物制品检定所；白术(Rhizoma Atractylodis macrocephalae)、枳实(Fructus Aurantii immaturus)、柴胡(Radix Bupleuri)、山楂(Fructus Crataegi)等药材均经山西职工医学院郭一敏教授鉴定；所用试剂均为分析纯。

2　色谱条件

　　YWG-C₁₈分析柱(4.6　mm×250 mm,10 μm),流动相：乙腈－水－甲醇-磷酸(20∶79.6∶0.4∶0.01)；检测波长：283 nm^［3］;流速1.5 mL^.min^-1；柱温：室温。

3　实验方法

3.1　选择性试验　按处方比例及生产制备方法，制备不含枳实的阴性样品，按样品测定项下样品溶液制备方法制备阴性溶液，进样10 μL，另取橙皮苷对照品溶液，进样10 μL。阴性溶液和对照品溶液色谱图见图1，对照品峰与阴性溶液峰没有重叠。

图1　高效液相色谱图
A.对照品　B.样品　C.阴性　1.橙皮苷

3.2　线性关系考察　准确配制每1 mL含橙皮苷0.1 mg的甲醇溶液，分别精密吸取2.0、4.0、8.0、12.0、15.0 μL依次进样，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，对照品进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线，回归方程为：
Y=173755.4X-1724.8　r=0.9993
橙皮苷峰面积与进样量之间有良好的线性关系，线性范围在0.2～1.5 μg之间。
3.3　精密度试验　取样品测定项下对照品溶液，重复进样5次，每次10 μL，测定峰面积，RSD=1.90%。
3.4　稳定性试验　取同一供试品，在0、3、6、12　h分别进样10 μL，记录峰面积，RSD=0.23%。
3.5　重复性试验　取批号为960528的同一批样品，按样品测定法测定6次，计算橙皮苷含量，RSD=2.6%。
3.6　加样回收率试验　取已知含量的本品(批号960528)内容物5份，精密称定，各加入对照品溶液适量，挥干，按样品测定法测定，分别计算回收率，结果平均回收率为99.39%，RSD为3.5%。

4　样品测定

4.1　样品溶液的制备　取胃利胶囊内容物约0.5 g，精密称定，置500 mL容量瓶中，加甲醇至近刻度，超声处理40 min，放冷，加甲醇至刻度，滤过，取续滤液为供试品溶液。
4.2　对照品溶液的制备　同线性关系。
4.3　测定法　分别精密吸取对照品溶液与样品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，色谱图见图1，以外标两点法计算样品中橙皮苷的含量，每批样品各测定3次，结果见表1。

表1　3批样品橙皮苷含量(%)

批　号

含量

RSD/％

960518

6.83

1.2

960523

6.67

1.3

960606

7.28

1.5

5　讨论

5.1　试验曾对超声提取不同时间(10～80 min)橙皮苷提出率进行了比较，表明处理40 min可提取完全。
5.2　在本文所确定的色谱条件下，橙皮苷峰与其它组分峰能达到基线分离，理论板数大于1500。
5.3　本法简便、灵敏、准确，为制剂的质量控制提供了依据。

作者单位：王晓枫　段秀俊　裴晓丽　朱秀珍(山西省药物研究所　太原　030045)
高燕萍　钟郁葱(山西中医学院　太原　030024)

参考文献

1　欧阳强，邱黎和，周郗竹. 高效液相色谱法测定枳实、枳术丸中橙皮苷的含量. 中成药，1996,18(7):9
2　王宝琹主编. 中成药质量标准与标准物质研究. 北京:中国医药科技出版社, 1994.140
3　肖崇厚主编. 中药化学. 上海:上海科技出版社, 1987.248

(本文于1998年9月17日收到)