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摘要 目的:建立测定血浆中氨溴索浓度的反相高效液相色谱法。
RP-HPLC
Method for the Determination Li Zhen,
Xu Xuejun and Hu Jinhong Abstract Objective:A RP-HPLC
method was developed for the determination of ambroxol in human
plasma. Method:All samples were extracted from
plasma with diethyl ether and back extraction in 0.01 mol.L-1 HCl. The analytical column was
Resolve C18 (5 μm,4.6 mm×250 mm).The mobile phase
consisted of acetonitrile-methanol-0.01 mol.L-1 phosphate buffer (pH 7.0)-tetrahydrofuran
(350∶350∶275∶25). The
flow rate was 1.5 mL.min-1,
and the detector was set at UV 242 nm. Results: The minimal detectable plasma drug concentration was
5 ng.mL-1.The
calibration curve was linear in the range of 10~320 ng.mL-1(H=2.45+1.64C,r=0.9995).
The RSD within day was 2.7%~5.3%. TheRSD between days was 3.2%~8.2%. Conclusion: This method has been applied to the pharmacokinetic study
after a single oral administration of 90 mg ambroxol hydrochloride
tablets in 8 healthy volunteers. 盐酸氨溴索(Ambroxol
hydrochloride),化学名为反-4-[(2-氨基-3,5-二溴苯甲基)氨基]环己醇盐酸盐,是溴己新的活性代谢产物[1],可明显减少咳痰和呼吸困难,并具有促进肺表面活性物质和气道液分泌及纤毛运动的多重作用,它毒性低,祛痰和改善肺功能作用较强,临床上主要用于急慢性呼吸道疾患,特别是慢性支气管炎的祛痰治疗[2]。 1 仪器与试药 日立655系列HPLC仪,包括655A-12型恒流泵,655A-22型可变波长紫外检测器和655B-71型微处理机;Rheodyne
7125进样阀,配以50 μL定量管。 2 色谱条件 分析柱为Resolve C18(中科院大连化物所,4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相采用乙腈-甲醇-0.01 mol.L-1 pH 7.0磷酸盐缓冲液-四氢呋喃(350∶350∶275∶25),流速1.5 mL.min-1,检测波长242 nm,室温25℃下操作。盐酸氨溴索的保留时间为3.96 min,空白血浆、对照品血浆及受试者血样的HPLC图谱见图1所示。 |
图1 盐酸氨溴索的HPLC色谱图 3 样品处理 取血浆0.5 mL,置10 mL具塞玻璃离心管中,加入0.01 mol.L-1 pH 10.0磷酸盐缓冲液0.5 mL和乙醚 4.0 mL,封口后涡旋混匀60 s,3500 r.min-1离心6 min,醚层转至另一10 mL具塞玻璃离心管中,加入0.01 mol.L-1盐酸200 μL,涡旋混匀60 s,3500 r.min-1离心6 min,弃去醚层,酸层进样50 μL。 4 标准曲线制备 精密称取盐酸氨溴索对照品25
mg,用蒸馏水定容于25 mL的容量瓶中,使成1 mg.mL-1的对照液。 5 回收率试验 空白血浆加入盐酸氨溴索对照溶液,使成20、80和320 ng.mL-1不同浓度,按血浆样品处理后进样,与相应的对照液峰高相比得到绝对回收率;血浆标准曲线上求得浓度与实际浓度相比得到相对回收率。结果见表1。 表1 回收率测定结果(n=5) |
浓度 | 绝对回收率 | 相对回收率 |
20 | 81.42±4.0 | 102.4±5.3 |
80 | 81.65±1.9 | 101.3±2.1 |
320 | 83.45±2.7 | 96.44±2.7 |
x | 82.17±3.0 | 100.0±4.3 |
配制高、中、低3种浓度的对照品血浆各5份,同法测定,计算方法的日内及日间精密度,结果见表2。 表2 精密度测定结果(n=5) |
加入量 | 日内 | 日间 | |||
测得量 | RSD | 测得量 | RSD | ||
20 | 21.87 | 5.3 | 22.00 | 8.2 | |
80 | 86.44 | 2.1 | 85.17 | 3.0 | |
320 | 329.60 | 2.7 | 324.00 | 3.2 |
男性健康志愿者8名,年龄22~24岁,平均(22.75±1.04)岁,体重57~70
kg,平均(64.25±6.58)kg,身高164~180 cm,平均(171.63±4.60)cm,所有志愿者受试前经体检心、肝、肾功能均正常,试验前一月内未服任何药品,均签署知情同意书并上报上海长海医院医学伦理委员会批准备案。 |
图2 8名受试者口服90 mg Mocosolvan的平均血药浓度-时间曲线 将8名健康志愿者不同时间测得的血药浓度用3P87程序经计算机自动迭代拟合,结果显示盐酸氨溴索在健康人体内的药物动力学过程呈二室开放模型,得出的有关药动学参数Ka,Cmax,tmax,t1/2β和AUC分别为(0.69±0.18)h-1,(163.17±32.41)ng.mL-1,(1.44±0.23)h,(7.97±1.17)h和(1307.28±142.69)h.ng.mL-1,主要药动学参数与国外文献报道一致[8]。 8 讨论 血浆中盐酸氨溴索采用乙醚提取,平均回收率大于80%,乙醚层再经0.01
mol.L-1盐酸提取后直接进样,无内源性杂质干扰测定。由于不需吹干,测定快速简便,适用于大批量生物样品的测定。 作者单位:第二军医大学长海医院临床药理室 上海 200433 参考文献 1 于书海,田世雄,何文等.盐酸氨溴索的合成.中国医药工业杂志,1996,27(10):435 (本文于1998年3月20日收到) |