高效液相色谱法测定复方健疗霜中三组分含量

摘要　目的：测定复方健疗霜中曲安奈德、盐酸苯海拉明和硝酸咪康唑的含量。
方法：高效液相色谱法，在Shim-pack CLC-phenyl柱上，以甲醇-水相(三乙胺2 mL，加水至300 mL，磷酸调pH至7.6)为流动相，检测波长：230 nm。
结果：本文可同时测定三组分的含量。曲安奈德0.020～0.080 g^.L^-1，盐酸苯海拉明0.080～0.320 g^.L^-1，硝酸咪康唑0.160～0.640 g^.L^-1范围内，峰面积与其浓度呈良好线性关系；平均回收率依次为100.4%，RSD=1.02%；100.6%；RSD=0.91%；100.5%，RSD=0.60%。
结论：方法简便、快速、准确，可作为样品的检测方法。

Determination of Three Components of Compound
Jianliao Cream by HPLC

Fei Luhua and Nie Xiaochun
(Wuhan Institute for Drug Control,Wuhan　430012)

Abstract　Objective：To separate and determine three constituents including triamcinolone acetonide,diphenhydramine hydrochloride and miconazole nitrate in Compound Jianliao Cream.Method:A HPLC method was used chromatographic conditions included Shim-pack CLC-phenyl column and the mobile phase consist of methanol and water(70∶30).The detection wavelength was 230 nm.Results:The separation and determination of three constituents could be accomplished simultaneously.The calibration curves were linear in the range of 0.020～0.080 g^.L^-1 for triamcinolone acetonide;0.080～0.320 g^.L^-1 for diphenhydramine hydrochloride;0.160～0.640 g^.L^-1 for miconazole nitrate.The average recoveries of triamcinolone acetonide,diphenhydramine hydrochloride,miconazole nitrate were 100.4%(RSD=1.02%)，100.6%(RSD=0.91%),100.5%(RSD=0.60%)respectively.Conclusion:This method was found to be simple,quick and accurate for simultaneous determination of the three constituents in Jianliao Cream.
Key words　triamcinolone acetonide,diphenhydramine hydrochloride,miconazole nitrate,HPLC

　　复方健疗霜是由曲安奈德(Triamcinolone acetonide)、盐酸苯海拉明和硝酸咪康唑等多种成分制成的软膏。主要用于治疗顽癣，对湿疹、皮炎也有一定的疗效。已见有分别测定曲安奈德、盐酸苯海拉明和硝酸咪康唑的液相色谱方法^［1～4］。三组分的色谱行为差异较大，迄今未见有同时测定三组分的液相色谱方法。本文在对多种色谱体系进行筛选的基础上，建立了以苯基硅烷键合硅胶为填充剂的高效液相色谱法，同时分离和测定复方健疗霜中三组分，并用于制剂的质量控制，切实可行，简便准确。

1　仪器与试药

　　Waters 510泵、490多波长紫外检测器、740色谱数据处理机。
复方健疗霜样品(含曲安奈德0.25%，盐酸苯海拉明1.0%，硝酸咪康唑2.0%)及曲安奈德、盐酸苯海拉明和硝酸咪康唑原料(符合中国药典规定)均由香港麒麟制药厂提供。所有试剂均为分析纯，水为重蒸水。

2　色谱条件

　　色谱柱：Shim-pack CLC-phenyl(10 μm,6.0 mm×150 mm)，日本岛津公司。检测波长：230 nm；流速：1.0 mL^.min^-1；柱温：室温；进样量：20 μL；流动相：甲醇-水相(三乙胺2 mL，加水至300 mL，磷酸调pH 7.6)(70∶30)

3　方法与结果

3.1　对照品储备液的配制　精密称取各对照品适量，加甲醇溶解，制成曲安奈德0.5 g^.L^-1、盐酸苯海拉明2 g^.L^-1、硝酸咪康唑4 g^.L^-1的对照品溶液。
3.2　系统适应性试验　按含量测定项下的方法分别记录色谱图。曲安奈德的理论塔板数应大于1 000，主药与相邻辅料的分离度在1.5以上。见图1。

图1　样品色谱图
1.曲安奈德　2.盐酸苯海拉明　3.硝酸咪康唑

3.3　线性回归　精密量取对照品储备液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 mL，用甲醇分别稀释至50 mL，精密量取此液20 μL注入色谱仪，测定，按外标法以峰面积A对浓度C(g^.L^-1)回归，曲安奈德，盐酸苯海拉明，硝酸咪康唑的线性范围分别为：0.020～0.080、0.080～0.320、0.160～0.640 g^.L^-1，回归方程分别为：
C=2.5×10^-6A-1.983×10^-4　r=0.9998
C=1.4×10^-6A-1.902×10^-4　r=0.9992
C=2.6×10^-6A-1.590×10^-4　r=0.9999
3.4　回收率　按处方比例配制各含曲安奈德、盐酸苯海拉明和硝酸咪康唑为标示量90.0%～110.0%的模拟样品6份，按含量测定项下方法测定。6次测定的平均回收率分别为：曲安奈德100.4%(RSD=1.02%)，盐酸苯海拉明100.6%(RSD=0.91%)，硝酸咪康唑100.5%(RSD=0.60%)。
3.5　含量测定　精密称取本品约1 g，用甲醇溶解，并稀释至50 mL。置冰浴中冷冻2 h，过滤，取续滤液20 μL注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积计算，见表1。

表1　样品含量测定结果(%，n=2)

批号

曲安奈德

盐酸苯海拉明

硝酸咪康唑

9609161

102.6

99.2

104.4

9609158

103.2

99.6

103.0

9609156

102.4

97.8

102.8

4　讨论

4.1　色谱柱的选择　实验过程中，曾分别尝试在十八烷基硅烷键合硅胶、辛烷基硅烷键合硅胶、硅胶、氰基等不同填料的色谱柱上考察曲安奈德、盐酸苯海拉明和硝酸咪康唑的色谱行为。由于三组分极性相差较大，在上述有些填料柱上选择适当的流动相，虽可分离这三组分，但不是保留时间过长，就是有基质的干扰。本文经反复筛选，确定了在苯基柱上，以甲醇-水相(70∶30)为流动相的色谱体系，分离本品中的三组分，可排除基质的干扰，分析时间在20 min可完成。
4.2　pH的选择　试验表明，当pH＜7时，盐酸苯海拉明几乎不保留。为了增加盐酸苯海拉明的容量因子，又要使三组分完全分离，本文选择pH为7.6。
4.3　甲醇浓度选择　硝酸咪康唑的容量因子随着甲醇的比例增加，显著减小。兼顾到样品的分离与基质的干扰，则选择甲醇的浓度为70%。
4.4　波长的选择　由于盐酸苯海拉明的吸收系数较小，因此选择其末端230 nm波长为检测波长，提高了其检测的灵敏度。
4.5　溶剂的选择　试验表明，用流动相作溶剂，虽没有负峰出现， 但曲安奈德的回收率略低(98.3%)。后改用甲醇作溶剂，虽有负峰，但曲安奈德的回收率提高为100.4%，并且不影响样品的分离和测定。

作者单位：武汉市药品检验所　430012

参考文献

1　张先洲，罗顺德，张帆等.HPLC测定硝酸咪康唑栓剂和霜剂的含量.药物分析杂志，1993，13(3)：198
2　刘伟.皮康霜中醋酸曲安奈德和硝酸咪康唑的HPLC测定.中国医药工业杂志，1995，26(3)：130
3　柳正良，主皓，杨悦武等.动态改性高效液相色谱法测定益康唑及其栓剂的含量.药物分析杂志，1995，15(1)：21
4　韩俊，曾焕俊，唐宏锋.高效液相色谱法测定康泰唑冲洗液中甲硝唑、醋酸氯己定和硝酸咪康唑的含量.药物分析杂志，1997，17(1)：9

(本文于1998年2月23日收到)