摘要 目的:为控制鳖甲煎胶囊中厚朴酚与和厚朴酚的含量,建立了高效液相色谱测定方法。方法:色谱柱为TSKgel-ODS-80TS(250
mm×4.6 mm),流动相:甲醇-水(75∶25),流速为0.5 mL.min-1,检测波长为294
nm。结果:厚朴酚与和厚朴酚均在20~320 ng范围内呈良好的线性关系,相关系数均为0.9999,回收率分别为105.1 %和101.5
%。结论:本文建立的高效液相色谱法为测定鳖甲煎胶囊中厚朴酚与和厚朴酚提供了可靠的分析方法。
Determination of Magnolol
and Honokinol
in Biejiajian Capsules by RP-HPLC Li Baoming and He Liyi (Institute of Materia Medica,Chinese
Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,Beijing
100050) Abstract Objective:A high performance liquid chromatographic method was
established for the determination of magnolol and honokinol in Biejiajian
Capsules.Method:The reversed-phase system consisting of ODS silica gel
column and MeOH-water(75∶25) as the mobile phase.The eluate with
a flow rate of 0.5 mL.min-1
was detected at the wavelength of 294 nm.Results:The calibration curves were linear between 20~320 ng(r=0.9999),the
recoveries were 101.5 % and 105.1 % respectively.Conclusion:This RP-HPLC method is simple,rapid,accurate,and is suitable
for the determination of magnolol and honokinol in Biejiajian Capsules. Key words Biejiajian Capsules,HPLC,magnolol,honokinol 鳖甲煎丸曾收载于中国药典1985年版一部,有活血化瘀的功效,鳖甲煎胶囊与丸剂处方相同,是由鳖甲、厚朴等23味中药组成的新剂型,疗效与丸剂相同,但具有服用方便的优点。我们选择厚朴中的厚朴酚与和厚朴酚为测定对象,以便控制此2种成分在制剂中的含量。文献报道测定复方制剂中的厚朴酚与和厚朴酚的方法有HPLC-荧光检测法[1],GC法[2,3],TLC法[4]及RP-HPLC法[5,6]等。本文采用前处理的方法,除去部分杂质,可同时测定制剂中厚朴酚与和厚朴酚的含量。 1 仪器
岛津LC-6A高效液相色谱仪;SPD-6A检测器;美国HP-3394积分仪;固定相:C18硅胶(5 μm),色谱柱:日本TSKgel-80TS(250
mm×4.6 mm)。 2 对照品与试剂
厚朴酚与和厚朴酚对照品购自中国药品生物制品检定所;甲醇:优级纯;乙醚:分析纯。鳖甲煎胶囊及阴性对照为广东省中山市中药厂提供;厚朴药材(Magnolia
officinalis Rehd.et Wils.)购自中山市药材公司。 3 色谱条件
流动相:甲醇-水(75∶25);检测波长:294 nm;流速:0.5 mL.min-1;AUFS:0.04。 4 实验方法与结果 4.1 对照品储备液的制备 精密称取厚朴酚与和厚朴酚对照品各约4
mg,用甲醇溶解,配制成0.16 mg.mL-1的甲醇储备液。 4.2 可行性试验 量取对照品储备液适量,制成8
μg.mL-1的甲醇溶液,进样;称取鳖甲煎胶囊内容物及阴性对照样品适量,按样品测定方法提取,进样,绘制色谱图,结果见图1。由图可知和厚朴酚与厚朴酚的保留时间分别为26
min和37 min,二者的分离度大于1.5。鳖甲煎胶囊中其它成分对测定厚朴酚与和厚朴酚没有影响。 4.3 线性关系考察 精密量取对照品储备液0.125、0.25、0.50、1.0、2.0
mL于10 mL容量瓶中,分别用甲醇稀释至刻度,摇匀,分别进样10 μL,以峰面积对浓度进行线性回归,得到厚朴酚、和厚朴酚回归方程和相关系数分别为:
Y=6778X+5365 r=0.9999
Y=7309X+9489 r=0.9999
厚朴酚与和厚朴酚的线性范围均为20~320 ng。 |
图1 HPLC色谱图
A.对照品 B.厚朴药材
C.鳖甲煎胶囊厚朴阴性对照 D.鳖甲煎胶囊
1.和厚朴酚 2.厚朴酚
4.4 精密度测定 精密量取同一对照品溶液10 μL(80 ng)共8份,进样,测定,厚朴酚与和厚朴酚峰面积的RSD分别为1.0
%、1.3 %。 4.5 回收率测定 精密称取鳖甲煎胶囊内容物2
g共8份,其中5份加入厚朴酚与和厚朴酚对照品储备液0.5 mL,各份依照样品含量测定项下方法操作,计算回收率,5次测定结果平均值分别是厚朴酚:105.1
%(RSD=7.6 %);和厚朴酚:101.5 %(RSD=2.3 %)。 4.6 样品测定 精密称取鳖甲煎胶囊内容物2
g(平均每粒胶囊内容物为420 mg),置园底烧瓶中,精密加乙醇50 mL称重,于90
℃回流提取2 h,放至室温,加乙醇补至回流前的重量,摇匀,过滤,弃去初滤液,精密吸取续滤液30
mL,减压蒸干溶剂,残渣用0.6 mol.L-1盐酸20
mL溶解,加乙醚萃取4次(10 mL×4),合并乙醚液,加2.0 mol.L-1的氢氧化钠液萃取4次(10
mL×4),合并氢氧化钠液,用盐酸酸化至pH 2,再加乙醚萃取4次(10 mL×4),合并乙醚液,加无水硫酸钠干燥,过滤,硫酸钠用乙醚洗3次,乙醚液合并后减压蒸干,残渣加甲醇溶解并定容至10
mL,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)过滤,进样10 μL,记录色谱峰面积,用外标法计算含量。测定3批样品,结果见表1。 表1 鳖甲煎胶囊中厚朴酚与和厚朴酚含量 测定结果(μg.粒-1,n=3) |
批号 | 厚朴酚 | 和厚朴酚 |
960820 | 13.92(3.0) | 22.57(1.3) |
960823 | 13.15(2.3) | 20.05(5.9) |
960826 | 13.77(4.7) | 23.19(1.8) |
注:括号内为RSD(%) 5 讨论 5.1 由于本品成分复杂,故样品初提液蒸干后需经过酸化、碱化等步骤去除杂质,若不经预处理,则对测定和厚朴酚有干扰,经过用氯仿、苯、乙醚等不同溶剂从水层中萃取厚朴酚与和厚朴酚的比较,以乙醚萃取效果最好。 5.2 厚朴药材中厚朴酚与和厚朴酚的含量均为2.27%,二者之和大于药典规定的3%。 5.3 厚朴药材中厚朴酚与和厚朴酚的含量高于药典规定,但测得胶囊中厚朴酚与和厚朴酚的含量只相当于原生药的3%,这是由于生药含量是定量地用乙醇回流提取,而胶囊内容物是水煎提取物,因此导致测得值很低。 5.4 色谱系统采用最简单的二元体系,避免了易损坏色谱柱的酸、碱,并降低了因使用乙腈引起的高费用。 作者单位:李宝明 何丽一 中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050
本文于1998年3月24日收到 参考文献
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2 娃尼亚,王小焕.藿香正气水中和厚朴酚与厚朴酚的含量测定.中成药,1989,11(2):16
3 何心亮.舒肝丸中厚朴的定量分析.中成药,1989,11(11):35
4 刘志红,田薇,陈乃武等.舒肝丸中厚朴酚与和厚朴酚的含量测定.中成药,1993,15(8):15
5 史林,聂万达,王文发等.香砂养胃丸中厚朴酚、陈皮甙的含量测定.中草药,1992,23(5):247
6 黄新生.反相HPLC测定木香顺气丸中厚朴酚与和厚朴酚的含量.中成药,1994,16(6):16 |
作者:
李宝明何丽一 2007-5-18