高效液相色谱法测定钙维康胶囊中维生素D3的含量

北京9702信箱国防科工委军事医学研究所　100101

　　钙维康是国防科工委军事医学研究所研制的新型高效中性补钙剂，主要用于预防和治疗各种钙缺乏症，其主要配方为：碳酸钙、枸橼酸、维生素D₃以及其它一些辅助成分。钙维康目前已获中华人民共和国发明专利(NO.97115225)及国防科工委卫生部批准文号：(1997)委制FPH5008，委制流字(1997)第01号。曾有文献报道用高效液相色谱法测定食品和某些药品中维生素D的含量^［1～3］。本实验建立了反相高效液相色谱测定钙维康胶囊中维生素D₃含量的方法。
1　仪器与试剂
日本岛津公司LC—6A液相色谱泵；SIL—6B自动进样器；SPD—6AV紫外-可见分光光度检测器；C—R6A色谱数据处理机；维生素D₃对照品(含量≥99.9 %)和维生素D₃原料药购自美国Sigma公司；钙维康为本所自制品；甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯。对照品储备液为1.000 mg/mL的维生素D₃甲醇溶液。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　Shim-pack CLC-TMS色谱柱(4.6 mm×15 cm，粒径5 μm)，北京分析仪器厂ODS保护柱(5 mm×50 mm，粒径5 μm)；柱温：30 ℃；流动相：甲醇—水—磷酸(90∶10∶0.1)；流速1.0 mL/min；检测波长280 nm；记录纸速1 mm/min。
2.2　系统适用性试验　精密量取对照品储备液适量，加甲醇稀释至10 μg/mL，进样；按钙维康处方配比制备不含维生素D₃的阴性样品；精密称取钙维康及其阴性样品适量，按样品测定方法提取，进样，绘制色谱图，结果见图1。由图可知维生素D₃的峰保留时间约为13.5 min；维生素D₃与其相邻峰的分离度是3.0，以维生素D₃计算理论板数是1154。在此条件下，钙维康中的其它成分对维生素D₃的含量测定没有影响。

图1　维生素D₃(A)、钙维康阴性
样品(B)、钙维康(C)色谱图
1.维生素D₃

2.3　线性关系　分别精密量取对照品储备液适量，用甲醇稀释成维生素D₃浓度是2、4、6、8、10 μg/mL的溶液，各溶液分别置自动进样器中自动进样(n=3)，记录维生素D₃峰面积。峰面积均值X对进样浓度Y(μg/mL)线性回归，得回归方程为：
Y＝0.4283+0.00005565X　r=0.9996
2.4　仪器精密度和方法重现性　取一样品溶液置自动进样器中，3 h内重复进样(n=5)，日内RSD为0.8 %。同一样品，连续3 d每天取样测定1次，日间RSD为1.8 %。
2.5　加样回收　精密称取已知维生素D₃含量的同一批钙维康5份，分别精密加入维生素D₃对照品，各份均依样品测定项下方法操作，计算回收率。5次测定结果，平均回收率为102.7 %，RSD为0.42 %。
2.6　样品测定　取钙维康胶囊15粒，取其药粉研细。精密称取细粉适量(约相当于维生素D₃ 28 μg)置50 mL具塞磨口三角瓶中，精密加入甲醇8 mL，精密称定，超声5 min，精密补加损失的甲醇，摇匀，将提取液置10 mL离心管中，离心(2500 r/min)3min，倾取上清液少许，置离心过滤管(加双层0.45 μm滤膜)中，离心过滤，进样20 μL，记录维生素D₃色谱峰，外标法计算含量。测定3批样品，结果见表1。

表1　样品测定结果(n＝3)

样品批号

含量/(μg/g)

RSD/%

970410—1

4.373

0.6

970410—2

4.489

1.4

970410—3

4.817

1.0

3　讨论
3.1　经稳定性试验，样品溶液在室温下(约20 ℃)置棕色容量瓶中，每隔1 h测定1次，测至5 h，维生素D₃的平均含量为4.184 μg，RSD为2.8 %。证明样品溶液中维生素D₃含量至少在5 h内稳定。
3.2　提取条件试验证明，加甲醇并超声5 min直接溶解，钙维康中维生素D₃可提取完全。
3.3　经紫外光谱扫描得知，维生素D₃的甲醇溶液最大吸收波长为280 nm。经反复试验，流动相选用甲醇—水—磷酸(90∶10∶0.1)，分离度较好，其中磷酸的加入是为了消除药物中某些组分的色谱干扰，避免峰拖尾。在此条件下，钙维康中的其它成分对维生素D₃含量测定没有影响。

参考文献
1　　吴怀春等.高效液相色谱法测定强化奶及食品中维生素D的含量.色谱，1997,15(1):43
2　　王桂珍等.高效液相色谱法测定维丁胶性钙注射液中维生素D₂的含量.中国药科大学学报，1987,18(4):287
3　　胡家炽等.维丁胶性钙注射液中维生素D₂的测定.中国医药工业杂志，1991,22(8):362

(本文于1997年10月20日收到)