高效液相色谱法测定葛根素注射液中葛根素的含量

山东省药品检验所　250012

　　葛根素注射液为新型血管扩张药，用于冠心病、心肌梗塞、心绞痛的治疗，其主成分葛根素为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根中提取、分离得到的以葛根素为主的异黄酮苷类，其含量测定方法，卫生部药品标准(试行)^［1］为紫外分光光度法。在生产和检验过程中发现，按100 %投料，紫外法测定其含量可达标示量的103 %左右，经薄层检查，其原料葛根素含杂质，易导致注射液测定含量偏高。本文采用高效液相色谱法，使葛根素与杂质得到良好分离后，测定葛根素的含量，其方法准确，结果可靠。
1　仪器与试药
TSP高效液相色谱仪(包括P 2000泵，AS 3000自动进样器，UV 2000检测器，IBM 350—450 DX2数据站)。
葛根素对照品(中国药品生物制品检定所提供)；对-羟基苯甲醛内标物(山东省药物研究所精制，色谱纯)。
乙醇(优级纯)，重蒸馏水，丙二醇(分析纯)，葛根素注射液(烟台中策药业有限公司提供)。
2　色谱条件
色谱柱：Turner C₁₈H₃₇，5 μm 4.6 mm×150 mm；流动相：乙醇—水(43∶207)；流速：1 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：250 nm；理论板数按葛根素计，不低于3000，与内标峰分离度大于5。
3　线性关系试验
取对-羟基苯甲醛适量，加流动相制成0.5 mg/mL的内标溶液。取105 ℃干燥至恒重的葛根素对照品适量，精密称定，用流动相溶解，制成0.3 mg/mL的溶液，精密取该溶液1、3、5、10、20 mL，分别精密加入内标溶液10 mL，摇匀，取各溶液10 μL进样，记录色谱图(见图1)。以葛根素峰面积和内标峰面积之比Y与浓度X(mg/mL)做线性回归，得回归方程为：
Y＝11.98X+5.673×10^-3　r=0.9991
即葛根素在0.027～0.2 mg/mL浓度范围内线性关系良好。

图1　色谱图
1.葛根素　2.内标　3～6.杂质

4　校正因子的测定
取在105 ℃干燥至恒重的葛根素对照品约20 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，精密取该溶液与内标溶液各10 mL混匀，取10 μL进样，记录色谱图，按对照品与内标的峰面积比计算校正因子。
5　回收率试验
根据葛根素注射液处方精密称取葛根素对照品并配制成模拟溶液(每2 mL的50 %丙二醇水溶液含葛根素100 mg)，精密取该模拟溶液1 mL，置250 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，精密取该溶液与内标溶液各10 mL，混匀，　取10 μL进样，以内标法计算，平均回收率为99.6 %(n=5)，　RSD为0.42 %。
6　样品测定
精密取本品，按回收率项下方法依法测定、计算，结果与紫外法^［1］比较，见表1。

表1　含量测定结果(标示量%，n=4)

批号

HPLC法

紫外法

9507021

98.0

101.6

9507022

98.2

101.6

9507023

98.3

101.8

7　讨论
葛根素注射液的含量测定，紫外法^［1］测得的含量为在250 nm波长处有紫外吸收的总黄酮的总量(将有紫外吸收的杂质一并计算入含量)，如葛根素提取纯度不好，引起实验误差较大；在本文色谱条件下，HPLC法能很好地将葛根素与其它杂质分离后定量，辅料对测定无任何干扰，正确反映了注射液中葛根素含量。

参考文献
1　　卫生部药品标准(试行).WS—257(X—207)—92

(本文于1997年12月11日收到)

*烟台中策药业有限公司