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HPLC法测定醋酸地塞米松片含量

来源:中国色谱网
摘要:安徽省淮北市药品检验所235000醋酸地塞米松是广泛应用于临床的肾上腺皮质激素药物,原料药含量测定采用HPLC法,片剂采用UV法[1]。为确定真正的干扰因素,本文建立片剂含量测定的HPLC法,与UV法比较,具有较高的专属性,且简便易行,现报道如下。样品醋酸地塞米松片为市售品(3批),对照品醋酸地塞米松及内......

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安徽省淮北市药品检验所 235000

  醋酸地塞米松是广泛应用于临床的肾上腺皮质激素药物,原料药含量测定采用HPLC法,片剂采用UV法[1]。在检验过程中,发现一些厂家生产的片剂最大吸收波长偏离规定的240 nm处[2]较多。为确定真正的干扰因素,本文建立片剂含量测定的HPLC法,与UV法比较,具有较高的专属性,且简便易行,现报道如下。
1 仪器与试药
美国SSI HPLC系统:SSI Series IV泵,SSI M500 UV—VIS检测器,Rheodyne 7725进样阀,ANASTAR(V
5.2)色谱工作站;SSI SUNTEK UVS—901紫外可见分光光度计。
样品醋酸地塞米松片为市售品(3批),对照品醋酸地塞米松及内标物氢化可的松由中国药品生物制品检定所提供,甲醇为分析纯,水为双蒸水。对照品及内标物制成0.3 mg/mL甲醇储备液。
2 实验方法及结果
2.1 紫外吸收图谱 精密量取对照品储备液2.0 mL置于50 mL量瓶中,以甲醇稀释至刻度,摇匀,备用;将样品1及样品2亦制成12.0 μg/mL的甲醇液;将上述溶液于200~300 nm间作吸收曲线(见图1)。结果样品2与对照品最大吸收波长240 nm一致;样品1最大吸收波长移至246.5 nm,且225 nm处亦有一吸收峰,240 nm与246.5 nm吸收值相差小于2.6 %。
2.2 色谱条件 Zorbax C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:甲醇—水(70∶30),经0.45 μm滤器过滤,流速:1.00 mL/min;检测波长:240 nm;进样量:20 μL;柱温:20 ℃。在此色谱条件下系统适用性测试结果见表1,色谱图见图2—A。

图1 紫外吸收图谱
1.醋酸地塞米松对照品 2.样品1 3.样品2

表1 系统适用性测试

 

醋酸地塞米松

氢化可的松

保留时间(min)

10.12

5.84

理论塔板数

4958

3559

拖尾因子

0.995

1.019

分离度

8.92

2.3 线性关系及校正因子 精密量取对照品储备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL分置于25 mL量瓶中,各精加内标储备液2.0 mL,以甲醇稀释至刻度,摇匀,测定色谱图(见图2—A)。以对照品与内标物峰面积比值(Y)对对照品浓度(C)作线性回归:
Y=0.0370C-0.0131 r=0.9999 n=6
结果表明醋酸地塞米松浓度在12.64~75.84 μg/mL范围内,线性关系良好。同时,测得校正因子f=1.228,n=6,RSD=0.68 %。

图2 对照品(A)与样品(B)色谱图
1.醋酸地塞米松 2.氢化可的松 3~5.杂质

2.4 回收率 精取对照品7.5 mg,置50 mL量瓶中,同时,取样品20片,精密称定,研细,精取细粉适量(约相当于醋酸地塞米松7.5 mg),置同一50 mL量瓶中,加甲醇40 mL,水浴(60 ℃),振摇使醋酸地塞米松溶解,放至室温,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液,精取续滤液5 mL至25 mL量瓶中,精加内标储备液2.0 mL,以甲醇稀释至刻度,摇匀,进样测定。按内标法计算醋酸地塞米松回收率为100.8 %,n=6,RSD=1.2 %。
2.5 精密度 精密量取对照品储备液3.0 mL置于25 mL量瓶中,精加内标储备液2.0 mL,以甲醇稀释至刻度,重复进样6次,测定校正因子,结果RSD=0.68 %,n=6。
2.6 样品测定 取样品20片,按“回收率”项下自“精密称定……”起操作,测得样品中醋酸地塞米松含量见表2,色谱图见图2—B。

表2 本法与UV法[1]含量测定比较(%)

样品

批号

本法(n=3)

UV法

1

961202

43.3(1.1)

101.5

2

950328

97.5(1.2)

99.1

3

951117

94.5(1.5)

95.9

注:括号内为RSD(%)

3 讨论
3.1 UV法[1]测定含量时,样品1最大吸收波长由240 nm偏移至246.5 nm且存在杂质峰(见图1);以本文HPLC法复核,样品1在240 nm处存在2个强杂质峰(见图2—B),结果说明UV法[1]测定已严重偏离真实含量;UV法[1]作样品1含量测定时已不能确定真正干扰原因,极易引起误判。建议中国药典中以吸收系数法(E1%1cm)测定含量时,明确规定供试品最大吸收波长如偏离规定测定波长,以劣药或假药论处。
3.2 本文HPLC法测定值普遍小于UV法[1]值(见表2),可能是HPLC分离出同吸收波长的干扰杂质,或测定的紫外仪存在系统误差。
3.3 样品1中的强干扰杂质(见图2—B)的成分待确定。

参考文献
1  中国药典.1995.二部:1075
2  中国药典1990版二部注释.905

(本文于1997年12月26日收到)

*安徽省颖上县药品检验所 236200

 

安徽省淮北市药品检验所 235000

  醋酸地塞米松是广泛应用于临床的肾上腺皮质激素药物,原料药含量测定采用HPLC法,片剂采用UV法[1]。在检验过程中,发现一些厂家生产的片剂最大吸收波长偏离规定的240 nm处[2]较多。为确定真正的干扰因素,本文建立片剂含量测定的HPLC法,与UV法比较,具有较高的专属性,且简便易行,现报道如下。
1 仪器与试药
美国SSI HPLC系统:SSI Series IV泵,SSI M500 UV—VIS检测器,Rheodyne 7725进样阀,ANASTAR(V
5.2)色谱工作站;SSI SUNTEK UVS—901紫外可见分光光度计。
样品醋酸地塞米松片为市售品(3批),对照品醋酸地塞米松及内标物氢化可的松由中国药品生物制品检定所提供,甲醇为分析纯,水为双蒸水。对照品及内标物制成0.3 mg/mL甲醇储备液。
2 实验方法及结果
2.1 紫外吸收图谱 精密量取对照品储备液2.0 mL置于50 mL量瓶中,以甲醇稀释至刻度,摇匀,备用;将样品1及样品2亦制成12.0 μg/mL的甲醇液;将上述溶液于200~300 nm间作吸收曲线(见图1)。结果样品2与对照品最大吸收波长240 nm一致;样品1最大吸收波长移至246.5 nm,且225 nm处亦有一吸收峰,240 nm与246.5 nm吸收值相差小于2.6 %。
2.2 色谱条件 Zorbax C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:甲醇—水(70∶30),经0.45 μm滤器过滤,流速:1.00 mL/min;检测波长:240 nm;进样量:20 μL;柱温:20 ℃。在此色谱条件下系统适用性测试结果见表1,色谱图见图2—A。

图1 紫外吸收图谱
1.醋酸地塞米松对照品 2.样品1 3.样品2

表1 系统适用性测试

 

醋酸地塞米松

氢化可的松

保留时间(min)

10.12

5.84

理论塔板数

4958

3559

拖尾因子

0.995

1.019

分离度

8.92

2.3 线性关系及校正因子 精密量取对照品储备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL分置于25 mL量瓶中,各精加内标储备液2.0 mL,以甲醇稀释至刻度,摇匀,测定色谱图(见图2—A)。以对照品与内标物峰面积比值(Y)对对照品浓度(C)作线性回归:
Y=0.0370C-0.0131 r=0.9999 n=6
结果表明醋酸地塞米松浓度在12.64~75.84 μg/mL范围内,线性关系良好。同时,测得校正因子f=1.228,n=6,RSD=0.68 %。

图2 对照品(A)与样品(B)色谱图
1.醋酸地塞米松 2.氢化可的松 3~5.杂质

2.4 回收率 精取对照品7.5 mg,置50 mL量瓶中,同时,取样品20片,精密称定,研细,精取细粉适量(约相当于醋酸地塞米松7.5 mg),置同一50 mL量瓶中,加甲醇40 mL,水浴(60 ℃),振摇使醋酸地塞米松溶解,放至室温,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液,精取续滤液5 mL至25 mL量瓶中,精加内标储备液2.0 mL,以甲醇稀释至刻度,摇匀,进样测定。按内标法计算醋酸地塞米松回收率为100.8 %,n=6,RSD=1.2 %。
2.5 精密度 精密量取对照品储备液3.0 mL置于25 mL量瓶中,精加内标储备液2.0 mL,以甲醇稀释至刻度,重复进样6次,测定校正因子,结果RSD=0.68 %,n=6。
2.6 样品测定 取样品20片,按“回收率”项下自“精密称定……”起操作,测得样品中醋酸地塞米松含量见表2,色谱图见图2—B。

表2 本法与UV法[1]含量测定比较(%)

样品

批号

本法(n=3)

UV法

1

961202

43.3(1.1)

101.5

2

950328

97.5(1.2)

99.1

3

951117

94.5(1.5)

95.9

注:括号内为RSD(%)

3 讨论
3.1 UV法[1]测定含量时,样品1最大吸收波长由240 nm偏移至246.5 nm且存在杂质峰(见图1);以本文HPLC法复核,样品1在240 nm处存在2个强杂质峰(见图2—B),结果说明UV法[1]测定已严重偏离真实含量;UV法[1]作样品1含量测定时已不能确定真正干扰原因,极易引起误判。建议中国药典中以吸收系数法(E1%1cm)测定含量时,明确规定供试品最大吸收波长如偏离规定测定波长,以劣药或假药论处。
3.2 本文HPLC法测定值普遍小于UV法[1]值(见表2),可能是HPLC分离出同吸收波长的干扰杂质,或测定的紫外仪存在系统误差。
3.3 样品1中的强干扰杂质(见图2—B)的成分待确定。

参考文献
1  中国药典.1995.二部:1075
2  中国药典1990版二部注释.905

(本文于1997年12月26日收到)

*安徽省颖上县药品检验所 236200

 

作者: 朱建永程民包菲卜玮* 2007-5-18
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