反相高效液相色谱法测定不同产地两头尖中竹节香附素A的含量

　　摘要　目的：建立两头尖中竹节香附素A的反相高效液相色谱测定法，并采用该方法对不同产地两头尖中竹节香附素A的含量进行比较。
方法：采用Alltech C₁₈分析柱，以甲醇-水(7∶3)为流动相，在207 nm波长处检测。
结果：吉林、黑龙江和辽宁3个省采集的两头尖中竹节香附素A的含量分别为0.32 %、0.3572 %、0.2808 %，平均回收率为100.3 %，相对标准偏差为1.4 %。
结论：该方法准确、灵敏、简便，适合于对两头尖药材进行质量控制。

RP-HPLC Determination of Raddeanin A in the Root of Anemone
raddeana Regel.from Different Areas

Li Chaosheng，Pan Shuyang，Han Weiting，Sun Kai and Song Huagang

(Academy of Traditional Chinese Medicine and Materia
Medica of Jilin Province,Changchun 130021)

Abstract　Objective：RP-HPLC method was established for the determination of raddeanin A in the root of Anemone raddeana Regel.The content of raddeanin A in the root of the plant from different areas was determined by this procedure and compared to each other.Method:The chromatographic system consists of Alltech C₁₈ column and mobile phase of MeOH-H₂O(7∶3)with a detection wavelength at 207 nm. Results:The content of raddeanin A in the root of Anemone raddeana Regel.collected from Jilin,Heilongjiang and Liaoning Province was 0.32 %、0.3572 % and 0.2808,respectly.The average recovery was 100.3 % and the relative standard deviation was 1.4 %.Conclusion:This method is simple,accurate,sensitive and can be used to control the quality of the herb.
Key words　Anemone raddeana Regel.，raddeanin A,HPLC

　　两头尖为毛莨科植物多被银莲花(Anemone raddeana Regel.)的根茎，具有祛风湿、消痈肿之功效，用于治疗风湿寒痹，四肢拘挛，骨节疼痛，痈肿溃烂等疾病。两头尖也是著名中成药“活络丹”和“再造丸”的主要原料^［1］。近年来，国内学者已从两头尖中分离出多种皂苷成分^［2～4］，药理实验显示，其中的竹节香附素A是两头尖具有抗癌作用的主要活性成分^［3］。关于两头尖的定量分析，通常采用比色法测定其中所含总皂苷，而相关的单体皂苷的定量分析方法未见报道。为完善两头尖的质量标准，我们建立了两头尖中竹节香附素A的液相色谱测定方法，并比较了不同产地两头尖中竹节香附素A的含量，该方法灵敏、准确，专属性强。

1　仪器与试药
日本Shimadzu LC-8A高效液相色谱仪。SPD-6A可变波长紫外检测器，C-R4A数据处理机。
竹节香附素A：从两头尖中提取分离制备，高效液相色谱测定纯度为98.5%。
两头尖分别从吉林、辽宁、黑龙江购得，经本院生药室鉴定为正品。
甲醇：色谱纯。水：二次蒸馏水。其它试剂均为分析纯。

2　色谱条件
色谱柱：美国Alltech C₁₈柱20 cm× 4.6 mm(5 μm)；流动相：甲醇-水(7∶3)；流速：1.0 mL^.min^-1，检测波长：207 nm；灵敏度：0.32 AUFS；纸速：2.0 mm^.min^-1，柱温：室温。

3　线性范围
精密称取干燥至恒重的竹节香附素A对照品2.1 mg于1 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度。精密量取对照品溶液2、4、6、8、10 μL，按上述层析条件测定，见图1-A，并回归，得一不通过原点的直线方程：
Y=821.74X-110.56　　r=0.9991
竹节香附素A在4.2～21 μg之间，峰面积与样品量之间呈良好线性关系。

图1　竹节香附素A对照品(A)与中药两头尖样品(B)色谱图　1.竹节香附素A

4　精密度测定和稳定性实验
取样品供试液5 μL进样测定6次，RSD为1.3 %。取样品供试液，每间隔一定时间测定，结果在48 h内测得峰面积值基本不变。

5　回收率实验
精密称取干燥至恒重的两头尖细粉约0.6 g共5份，分别加入竹节香附素A对照品2.0 mg，按样品供试液制备步骤提取，残渣用甲醇溶解于10 mL容量瓶中，并稀释至刻度。经0.45 μm微孔滤膜过滤，取5 μL进样测定，测得回收率为100.3 %(n=5)，RSD为1.4%。

6　样品测定
精密称取不同产地两头尖粉末5.0 g各3份，置于索氏提取器中，加入甲醇回流提取，挥去甲醇，残渣用少量水溶解，乙醚萃取3次，乙醚层合并。用水洗涤乙醚层3次，合并水层，用水饱合正丁醇萃取3次，合并正丁醇层，挥去正丁醇，残渣用甲醇溶解，定容于10 mL容量瓶中。吸取5 μL进样测定，竹节香附素A与其它皂苷成分达到基线分离(见图1-B)，根据被测组分峰面积，用外标法计算含量。见表1。

表1　不同产地两头尖中竹节香附素A含量(n=3)

产　地

含量/%

RSD/%

吉　林

0.32

1.0

黑龙江

0.36

1.1

辽　宁

0.28

1.6

　　由表1可见，吉林和黑龙江的两头尖中竹节香附素A含量差别不大，而辽宁的样品中竹节香附素A含量明显低于前两者。

7　讨论
对竹节香附素A对照品的甲醇溶液作紫外光谱扫描，在207 nm处有最大吸收，因此选择207 nm为检测波长。
我们分别选择70 %甲醇水溶液和45 %乙腈水溶液为流动相对竹节香附素A对照品进行纯度测定，结果一致。由于乙腈毒性大且价格高，因此选择70 %甲醇水溶液为流动相。

　*　吉林省药品检验所
* *　吉林省医院
作者单位：吉林省中医中药研究院　长春　130021

参考文献

　[1]　中国药典.1995.一部：149
　[2]　吴凤锷.中药竹节香附化学成分的研究.科学通报，1984，29(17)：1047
　[3]　吴凤锷.中药竹节香附化学成分的研究　Ⅱ.化学学报，1984，42(3)：253
　[4]　吴凤锷.中药竹节香附化学成分的研究　Ⅵ.化学学报，1985，43(7)：692

本文于1997年9月18日收到