高效液相色谱法测定注射液中普鲁卡因和利多卡因含量

　　普鲁卡因和利多卡因在注射液中为复合麻醉剂。文献上曾见报道采用高效液相色谱外标法测定普鲁卡因和利多卡因^［1］，我们建立了高效液相色谱内标法，同时测定普鲁卡因和利多卡因，具有简便、快速、准确、重现性好的特点。

1　仪器与试药
仪器：Waters－510液相色谱仪，HP－DAD检测器，HP 9000－300型数据处理机，U6K微量进样器。
试药：盐酸普鲁卡因对照品（天津市药品检验所，纯度 99. 5%）；盐酸利多卡因对照品（天津市药品检验所，99. 6%）；氯霉素标准品(中国药品生物制品检定所)；无水甲醇（色谱纯，北京化学试剂厂）；其它均为分析纯。

2　色谱条件
色谱柱：Waters μ-Bondpak C₁₈分析柱 3.9 mm×150 mm；流动相：0.1 ％三乙胺(TEA)缓冲液(TEA 0.5 mL加水稀释至500 mL, 浓硫酸调节至 pH 3.0)-甲醇(60∶40)；流速：1 mL^.min^-1;紫外检测波长240nm；进样量10 μL。
在本实验条件下，色谱分析结果见图1。

图1　色谱图
1.普鲁卡因　2.利多卡因　3.氯霉素

3　实验方法及结果
3.1　标准曲线的绘制
精密称量普鲁卡因100 mg 和利多卡因 150 mg, 加水溶解, 配成含普鲁卡因 2 mg^.mL^-1, 利多卡因 3 mg^.mL^-1 的贮备液。
精密称量氯霉素标准品 250 mg 加水溶解, 配成 2. 5 mg^.mL^-1 的内标液。
分别精密量取贮备液 50、100、 150、200、250μL, 再各加入内标液100 μL,加水至1 mL, 配得普鲁卡因分别为 0.1、0.2、0.3、 0.4、0.5 mg^.mL^-1,利多卡因浓度分别为 0.15、0.30、0.45、0.60、0.75 mg^.mL^-1, 氯霉素浓度为 0.25 mg^.mL^-1 的系列溶液, 进行色谱分析。
以各组分与内标物的峰面积比为纵坐标，浓度为横坐标，进行直线回归，结果普鲁卡因及利多卡因回归方程分别为：
A = 0.0004 + 2.5965 C　r=0.9997　n=5
A = 0.0019 + 1.7817 C　 r=0.9997　n=5
线性范围分别为0.1～0.5、0.15～0.75 mg^.mL^-1。
3. 2　精密度试验　 用不同浓度的标准溶液进行精密度实验, 由上述方程计算实测浓度,结果普鲁卡因平均日内精密度RSD=0.77%, 平均日间精密度RSD=1.3%; 利多卡因平均日内精密度RSD=0.73%, 平均日间精密度RSD=1.1%。
3.3　回收率试验　按处方量精密称量普鲁卡因、利多卡因对照品和其他原、辅料, 溶解,稀释至测定线性范围内, 测定, 计算回收率, 平行操作 5 次。同时作其他原、辅料空白测定。其他原、辅料无吸收,不影响含量测定。普鲁卡因回收率为 101.8%,RSD=0.7%; 利多卡因回收率为 99.53%,RSD=0.90%。
3.4　样品测定　按处方比例称量普鲁卡因、利多卡因和其他原料和辅料, 溶解, 稀释至测定线性范围内, 测定。结果见表1。

表1　样品测定结果(n=4)

组分

进样浓度/
mg^.mL^-1

实测浓度/
mg^.mL^-1

百分标示量/
%

RSD
/%

普鲁卡因

0.4016

0.4006

99.76

0.55

0.4004

0.3986

99.56

0.50

0.4016

0.4035

100.5

1.29

利多卡因

0.4016

0.3964

98.69

0.68

0.4000

0.3931

98.27

0.54

0.4000

0.3979

99.47

0.82

4　讨论
在选择本品各组分检测波长时，对普鲁卡因、利多卡因和氯霉素的水溶液进行了紫外扫描，其中普鲁卡因在 290 nm、220 nm 有吸收峰，241 nm 为其吸收谷，氯霉素峰值吸收在 275 nm，谷值吸收在 237 nm，并且在 235～240 nm 之间吸收度变化不大，所以选择测定波长为 240 nm。由于普鲁卡因的吸收系数远远大于利多卡因，240 nm波长处利多卡因的吸收系数大于其峰值(260 nm)的吸收系数，故选择 240nm作为检测波长有利于两组分的同时测定。
在本实验研究中，流动相对色谱分离的影响很大。0.1％三乙胺缓冲液的pH对色谱分离影响较大，pH 升高会延长出峰时间，导致成分不出峰；pH降低会缩短出峰时间而使分离不理想。流动相中甲醇比例增加，各组分保留时间缩短，利多卡因与氯霉素不易分离；甲醇比例减小，又会使峰形加宽，导致拖尾。所以为了使各组分既能分离，又有较短的保留时间，采用 0.1％三乙胺缓冲液(pH 3.0)－甲醇(60∶40)的流动相。

*　天津二医学习生
作者单位：徐风华　张志萍　雷　兰(解放军总医院药材处　100853)；
赵玉兰　杨　军(解放军总医院实验仪器室)

参考文献

　[1]　王家蕊，夏传琪. 高效液相色谱法同时测定普鲁卡因和利多卡因的含量.天津医科大学学报，1995，1(4): 56

本文于1997年12月26日收到