RP-HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量*

　　杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)有降低血压，补肾安胎的功效，主要成分为杜仲胶、氯原酸、桃叶珊瑚苷等。Charles从中国产杜仲中分离得到了松脂醇二葡萄糖苷(pinoresind diglucoside)，并确证了其为杜仲降压的有效成分^［1］，同时向多个国家申请了专利。唯一明确的松脂醇二葡萄糖苷的含量测定法有正相高效液相色谱法^［2］，我们在药典标准制订过程中，采用了反相高效液相法测定其含量，流动相为甲醇-水(25∶75)，方法简便，松脂醇二葡萄糖苷能得到较好的分离。

1　仪器与试药

　　SP8810型高效液相色谱仪；Spectra 200型检测器；SP4400积分仪。
松脂醇二葡萄糖苷对照品为按文献［3］方法制得的白色块晶，mp 226～227 ℃，［α］²⁵_D-26.3°(C，1.50，H₂O)，最大紫外吸收波长为276.5 nm，226.5 nm；其IR及酶解后乙醚提取所得苷元之NMR特征，均与文献［1，3］中松脂醇二葡萄糖苷及其苷元结构相一致。归一化法测得纯度为99.4%。杜仲药材为药典制定标准的样品。其它试剂均为分析纯。

2　色谱条件

　　色谱柱：RP C₁₈，4.6 mm×220 mm 10 μm，大连化物所；流动相：甲醇-水(25∶75)；流速：1.0 mL^.min^-1；检测波长：277 nm；纸速：0.25 cm^.min^-1；松脂醇二葡萄糖苷峰保留时间约为8 min。

3　测定方法

3.1　对照品溶液的制备　精密称取松脂醇二葡萄糖苷对照品适量，配制成0.5 mg^.mL^-1的甲醇溶液。
3.2　供试品溶液的制备　按文献［2］方法制备，即得。
3.3　测定方法　精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，用外标法计算含量。

4　结果

4.1　线性范围　精密吸取0.549 mg^.mL^-1的对照品溶液2，4，6，8，10 μL进样，测定峰面积，以峰面积Y对进样量X(μg)回归得方程：
Y=117 313.7X-8 439.4　r=0.999 7
结果表明，松脂醇二葡萄糖苷在1.0～5.0 μg间呈良好的线性关系。
4.2　精密度和重现性试验　精密吸取0.549 mg^.mL^-1的对照品溶液10 μL进样，连续测定5次，峰面积分别为627 988，626 117，619 482，630 821，623 261，RSD为0.7%。称取陕西城固产杜仲5份，按样品测定方法操作测得平均含量为0.258%，RSD为0.6%。
4.3　回收率测定　精密称取已测知含量的陕西城固产杜仲1 g共6份，分别加入对照品1和2 mg，按样品测定方法制备溶液，进样10 μL，计算得平均回收率(n=3)分别为98.4%(RSD=1.5%)，99.2%(RSD=1.1%)。
4.4　样品测定　取不同产地产的杜仲样品，照拟定测定方法测定含量，结果贵州、云南、陕西城固、陕西西乡、陕西勉县样品中松脂醇二葡萄糖苷平均含量分别为0.043%，0.146%，0.255%，0.344%，0.506%，RSD分别为3.3%，0.48%，2.8%，1.8%，1.7%，n=3。色谱图见图1。

图1　样品色谱图
1.松脂醇二葡萄糖苷

5　讨论

5.1　松脂醇二葡萄糖苷在甲醇中有较好的溶解度，经试验选用甲醇-水(2∶8)出峰较为合适。在流动相中，松脂醇二葡萄糖苷的UV λ_max(lgε)为277 nm(3.70)、227 nm(4.28)。选用277 nm为测定波长，系统稳定快，干扰小。
5.2　用氯仿除去样品中橡胶，再用甲醇回流提取，效果较好。
5.3　不同产地产的杜仲中糖苷含量有一定的差异，陕西产杜仲中糖苷含量较高。■

*　本文为药典会标准科研资助项目
** 汉中药检所
*** 西北大学

*本文为药典会标准科研资助项目
作者单位：徐长根（陕西省药品检验所　西安　710061）
冯建斌（汉中药检所）
孙文基（西北大学）

参考文献：

［1］Charles J Sih,Ravikumar P, Huang Fuchin,et al. Separation and Synthesis of pinoresinol diglucoside moides olive. J Am Chem Soc,1976,17:5412
［2］沙振方，孙文基.杜仲中松脂醇二葡萄糖甙的含量测定.药学学报，1986，21(9)：708
［3］Charles J.Glycosides of 2,6-Bis(Hydroxy-phenyl)-3,7-Dioxabicycld［3,3,0］Octane.United States Patent，1976.688,275

收稿日期：1999-01-19